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一键询价大鼠肝上皮样干细胞操作前打开紫外灯30-60分钟,这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果,但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置,可以与紫外灯一起打开,大鼠肝上皮样干细胞此时不需要抽滤开的过大就可以。(所谓的抽滤装置就是就是那个风机,就是吹风超净工作台,不是过滤培养液的)!
细胞传代培养(消化法)具体操作:
一:传代前准备;
1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械:保证足够的*作空间,不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微波炉内高火,8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液:大鼠肝上皮样干细胞取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。
二:胰蛋白酶消化;
1.加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。
2. 大鼠肝上皮样干细胞 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。
3.吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。
三:吹打分散细胞;
1.吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
2.吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。
3.平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8分钟。
4.弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
四:分装稀释细胞;
1.分装:将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。
2.显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。
五:继续培养;
用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。大鼠肝上皮样干细胞传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25%时为一个+,占50%为++,占75%时为+++。
XY1718 白球拟酵母
XY1719 白浅灰链霉菌
XY1720 白鲢尾鳍细胞,SCF细胞
XY1721 白介素-2转染耐VP16绒癌细胞,JEG-3/VP16-IL-2细胞
XY1722 白僵菌
XY1723 巴氏醋杆菌巴氏亚种
XY1724 阿拉伯糖醇汉逊酵母
XY1725 Walker氏癌肉瘤256瘤株 W256细胞
XY1726 VERO衍生株 SVP细胞
XY1727 U-2 OS(骨肉瘤细胞)?U-2 OS细胞
XY1728 T细胞,CTLL-2细胞
XY1729 T淋巴细胞白血病细胞,HuT78细胞
XY1730 TNFa转染耐VP16绒癌细胞,JEG-3-VP16-TNFa细胞
XY1731 T 淋巴细胞白血病细胞) Jurkat,Clone E6-1细胞
XY1732 SV40转染人成骨细胞,hFOB1.19细胞
XY1733 SV40转化的非洲绿猴肾细胞,COS-7细胞
XY1734 SV40永生化的人胚肾上皮细胞,293T细胞
XY1735 SV40T转化的人胚肾细胞(亚系) 293T/17细胞
XY1736 SV40 转染成骨细胞,hFOB 1.19细胞
XY1737 SV40 转化的非洲绿猴肾细胞, COS-1细胞
XY1738 SRSV转化的3T3细胞) SRSV/3T3?细胞
XY1739 SD大鼠骨髓间充质干细胞,SDBMSC细胞
XY1740 RD(恶性胚胎横纹肌瘤细胞)? RD细胞
XY1741 NFS-60细胞,NFS-60细胞
XY1742 mouse N3 mouse N3细胞
XY1743 Mo-MuLv感染的3T3细胞,Mo-MuLv/3T3细胞
XY1744 LLC小鼠 Lewis 肺癌细胞,Lewis细胞
XY1745 Leuwis肺癌细胞,LLC细胞
XY1746 KM小鼠子宫颈癌瘤株 U27细胞
XY1747 KM小鼠未分化神经胶质瘤瘤株 B22细胞
XY1748 KM小鼠网织细胞肉瘤瘤株 LⅡ细胞
XY1749 KM小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株 G422细胞
XY1750 K562耐阿霉素细胞株 K562/ADP细胞
XY1751 HPVl6 E6、E7和ras基因共转化的C57BL/C(H-2b)小鼠肺上皮细胞,TC-1细胞