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一键询价温育是小鼠成纤维细胞生长因子8(FGF8)检测试剂盒测定中影响测定成败最为关键的一个因素。小鼠成纤维细胞生长因子8(FGF8)检测试剂盒作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。
温育这一步是临床小鼠成纤维细胞生长因子8(FGF8)检测试剂盒测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟~1小时,进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1~2小时才能有较完全的结合,低于1小时,可能会影响测定下限。因此,关于温育,在实际测定操作中一定要注意以下几点:
(1)要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说,加完样本和/或反应试剂后,将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃,需要一定的时间,尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下,这段升温时间可能还比较长,而在临床实验室中,很少有人注意这个问题,通常是将微孔板一放入温箱即开始计时,这样就很容易造成实际测定中温育时间不够,弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题,就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间,在做HBsAg测定的室内质控中,测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时,总是测不出来,不知原因为何?这可能就与南方冬天室内温度较低有关,此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够,以致弱阳性样本测定为阴性。因此,为保证37℃下足够的温育时间,小鼠成纤维细胞生长因子8(FGF8)检测试剂盒临床实验室可自行确定本实验室不同季节(不同室温下)微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃,从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是,用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。
(2)温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明书中,指出温育温度可有两种,例如,一种是37℃下1小时,另一种则为43℃下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看,在较低的温度下反应较长的时间最为完全。如2~8℃下反应24小时。较高的反应温度,由于分子运动的加怜惜,反应时间缩短,这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题,但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的可能。因此,我们建议在临床小鼠成纤维细胞生长因子8(FGF8)检测试剂盒测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。
(3)“边缘效应”的排除。以前在使用96孔板的ELISA测定中,常发现有“边缘效应”,即外周孔显色较中心孔深,产生这种“边缘效应”的原因可能为 96孔板周孔与中心孔表面或热力学特征的不同。但有研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的常规 ELISA测定中,将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如37℃),就可以很容易地排除“边缘效应”,并且可提高测定的重复性。
总而言之,在临床小鼠成纤维细胞生长因子8(FGF8)检测试剂盒测定中,要保证好的测定效果,可采用下述简单办法来确保温育条件,即尽量采用水浴,温育中让微孔板浮于水面上,或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒,放于温箱中,这样就会因为板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触,以及水浴箱或湿盒内的高温度,而使反应溶液的温度迅速与温室平衡。
hzB120Ra 大鼠精氨酸酶(Arg)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for ArginaHZ (Arg)
hzF416Ra 大鼠巢蛋白2(NID2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Nidogen 2 (NID2)
hzB404Ra 大鼠Thy1细胞表面抗原(Thy1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Thy1 HZll SurfaHZ Antigen (Thy1)
hzG515Ra 大鼠肥大细胞类糜蛋白酶1(CMA1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for ChymaHZ 1, Mast HZll (CMA1)
hzD873Ra 大鼠胰岛素样蛋白3(INSL3)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Insulin Like Protein 3 (INSL3)
hzG438Ra 大鼠钙结合蛋白(CALB)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Calbindin (CALB)
hzB879Ra 大鼠载脂蛋白F(APOF)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Apolipoprotein F (APOF)
hzA938Ra 大鼠足突蛋白(PDCN)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Podocin (PDCN)
hzB267Ra 大鼠激肽原1(KNG1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Kininogen 1 (KNG1)
hzG501Ra 大鼠脂素1(LPIN1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Lipin 1 (LPIN1)
hzF320Ra 大鼠羧肽酶B1(CPB1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for CarboxypeptidaHZ B1, Tissue (CPB1)
hzB897Ra 大鼠胰岛素降解酶(IDE)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Insulin Degrading Enzyme (IDE)
hzC874Ra 大鼠斯钙素1(STC1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Stanniocalcin 1 (STC1)
hzL514Ra 大鼠丝蛋白结合LIM蛋白1(FBLIM1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Filamin Binding LIM Protein 1 (FBLIM1)
hzA238Ra 大鼠酪胺酸酶(TYR)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for TyrosinaHZ (TYR)
hzA691Ra 大鼠激肽释放酶6(KLK6)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Kallikrein 6 (KLK6)
hzC888Ra 大鼠嗜铬蛋白B(CHGB)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Chromogranin B (CHGB)
hzD950Ra 大鼠孕烷X受体(PXR)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Pregnane X ReHZptor (PXR)
hzD405Ra 大鼠肌肉磷酸果糖激酶(PFKM)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for PhosphofructokinaHZ, Muscle (PFKM)
hzB307Ra 大鼠纤维蛋白肽B(FPB)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Fibrinopeptide B (FPB)
hzC746Ra 大鼠外周鞘磷脂蛋白22(PMP22)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Peripheral Myelin Protein 22 (PMP22)
hzL969Ra 大鼠醌NADH脱氢酶1(NQO1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for NADH DehydrogenaHZ, Quinone 1 (NQO1)
hzB834Ra 大鼠凝血因子Ⅺ(F11)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Coagulation Factor XI (F11)
hzB538Ra 大鼠细胞胱硫醚γ裂解酶(CHZ)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Cystathionine Gamma LyaHZ (CHZ)
hzB320Ra 大鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Thymic Stromal Lymphopoietin (TSLP)