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获取电话本试验采用改良过碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记在抗体上[1]，标记完后取上清用Sephedex G200 凝胶层析进行纯化，洗脱液为0.2mol/L pH7.4的PBS，流速为15ml/h，分步收集，每支3ml，以紫外分光光度计测A280吸光度值，以洗脱体积为横坐标，吸光值为纵坐标做图，收集第一峰即为酶标抗体峰。小鼠蛋白二硫化物异构酶A4(PDIA4)ELISA试剂盒
标记完后用紫外分光光度计在分别在280nm、及403nm处测定酶标记物的A值，计算免疫球蛋白量、摩尔比值、酶结合率以及标记率。
1.2 包被用缓冲液及最适包被抗原浓度的优化
1.2.1 包被缓冲液的优化
小鼠蛋白二硫化物异构酶A4(PDIA4)ELISA试剂盒包被抗原时，为了得到最佳的包被效果，我们采用了碳酸盐缓冲液（50mM ph9.6 ）、磷酸盐缓冲液（50mM ph7.6）、以及TRIS盐酸缓冲液（50 mM ph7.6）三种缓冲液作为包被液，抗原包被浓度为5ug/ml，及2.5ug/ml,酶标抗体工作浓度为1：400及1：300，用自动酶标仪分析，选择最佳的包被缓冲液系统。同时为了保证缓冲液能够长期保存，我们在包被液中添加了0.01%的硫柳汞作为防腐剂。
临床考核血清盘的制备要求 1、 采用人的原血清； 2、 血清盘应具有相应的稳定性； 3、 血清盘中样本不含防腐剂，或只含极微量的、不影响检验结果的防腐剂； 4、 血清盘所包含的阴性样本和阳性样本约各占一半； 5、 阳性样本中，应有一定数量的强阳性和弱阳性样本； 6、 血清盘中应有一定数量的临界值上、下含量的样品，以检验试剂的灵敏度。 7、 血清盘中应包含与该项检验相关的病种样本和已积知具有干扰物质（RF因子）的样本， 以检验试剂的特异性。小鼠蛋白二硫化物异构酶A4(PDIA4)ELISA试剂盒
正态分布及标准差 ELISA试验中，检验同一样本达20次以上时，就会发现这组数据（指测定结果的吸光值）分布在均值两侧，大部分集中在均值附近。如果以测定值为横坐标，以出现的频率为纵坐标作图，就可绘出一个呈钟形的曲线图。如图5-1，钟顶处为均值，其他值以均值为中心对称分布，这就是正态分布。 正态曲线以下的面积称概率，常用样本的均数（X）和标准差（SD）来表示，其计算方法如下： 均值、标准差和概率的关系如下： X±1SD，概率0.68 X±2SD，概率0.95 X±3SD，概率0.99 换言之，当ELSIA检测同一样本达一定次数后所得的一组数据，其中靠近均值（X）的±1SD范围内的数据，占该组数据的68%，在X±2SD范围内分布的数据占总体的95%，在X±3SD范围内分布的数据占总体的99%。当我们要求检验结果在X±2SD范围内为合格时，将有95%的数据可能合格。小鼠蛋白二硫化物异构酶A4(PDIA4)ELISA试剂盒
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