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一站式沉淀法miRNAout

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一站式沉淀法miRNAout 人线粒体基因组的特点： 1、人线粒体基因组为16，569bp的双链闭环分子，一条链为重链(H链)，一条链为轻链(L链)，两条链均有编码功能，每个 mtDNA分于编码13种蛋白质和24种结构RNA(22rRNA，2tRNA)． 2、线粒体DNA为母系遗传． 3、结构基因不含内含子，部分区域有基因重叠，因此病理性mtDNA突变更易发生． 4、mtDNA突变频率更高． 5、线粒体DNA突变的表型表达与核DNA不同。第四节细菌和病毒基因组

一、细菌基因组的特点。 1．功能相关的几个结构基因往往***在—起，受它们上游的共同调控区控制，形成操纵子结构， 2．结构基因中没有内含子，也无重叠现象。 3．细菌DNA大部分为编码序列。

二、病毒基因组的特点 1．每种病毒只有一种核酸，或者DNA，或者RNA； 2．病毒核酸大小差别很大，3X103一3X106bp； 3．除逆病毒外，所有病毒基因都是单拷贝的。 4．大部份病毒核酸是由一条双链或单链分子(RNA或DNA)，仅少数RNA病毒由几个核酸片段组成． 5．真核病毒基因有内含子，而噬菌体（感染细菌的病毒）基因中无内含子． 6．有重叠基因．一站式沉淀法miRNAout

转录后加工在细胞核内对基因产物(mRNA前体)进行各种修饰、剪接和编辑，使编码蛋白质的外显子部分连接成为一个连续的开放读框(open reading frame，ORF)的过程称为转录后加工．一、mRNA前体加工的分子机制 - 核内mRNA前体—异质性核RNA(heterogeneous nuclear RNA，hnRNA)， hnRNA与蛋白质结合形成核异质性核糖核蛋白(hnRNP), mRNA前体的加工在hnRNP上进行． (一)5’-端加帽(capping) —mRNA前体的5’-端加甲基化鸟苷(m7pppN) 5’端m7G帽子结构的作用： 1．使mRNA更稳定 2．增加蛋白质合成的效率 3．帽子结构对mRNA前体的剪接是必需的（二)3’-端接多聚腺苷(poly(A)) —在mRNA前体3’端接上一个约200—250个腺嘌呤核苷酸(A)的尾巴。 poly(A)尾巴的作用： 1．有利于mRNA通过核孔； 2．参与稳定mRNA；一站式沉淀法miRNAout 3．增强翻译效率。（三)mRNA前体的剪接剪接(sp!icing)—剪除内含子，并将外显子连接 1．真核内含子的序列特征：真核内含子总是由Gu开始，以AG结束，内含子的5’-端剪接点(供位)和3’-端剪接点(受位)，以及内含子中的一个内部序列分支点（branch site)是mRNA前体正确剪接所必需的。 2．mRNA前体的剪接机制 -剪接过程由二步连续的转酯反应组成．该过程中产生一个套索状中间体（ lariat intermediate)，结果使2个原先被分隔的外显子连接。 3．剪接体(spliceosome) 细胞核内的小分子RNA(一般≤300碱基)—SnRNA（small nuclear RNA)，包括U1—U6等。 snRNA与特异的蛋白质形成复合物-SnRNP．mRNA前体与snRNP形成的复合物—剪接体．mRNA前体的剪接通过剪接体进行。

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