人β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISA试剂盒中加样须注意如下问题:
1. 吸取样品时,加样枪吸头不应黏附多余的液体;加样时不可90度向孔中滴加液体,这样会导致液体残留在吸头上,加样不准确!
2. 不要将吸头伸入孔中,一方面若接触孔底可能压弯吸头,另一方面可能会将孔中的液体吹起来,加样不准确!
正确的加样方法应为45度,吸头贴着孔壁加入,应注意:
1. 角度太小,会使液体残留在孔壁上,导致加样不准确!
2. 吸头应当贴着管壁和液面的交界处!
在目前的以HRP作为标记酶的商品ELISA试剂盒中,如以TMB为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以OPD为底物,则试剂盒提供OPD片剂或粉剂,临用前配制。一般商品试剂盒显色反应条件为37℃或室温反应15~30分钟。从理论上说,37℃30分钟才可以使HRP的底物催化反应完全,尽管在最初的10分钟内,绝大部份催化反应即可完成。因此,为使弱阳性样本孔能有充分的显色,建议在37℃下反应25~30分钟后,终止反应比色测定。
此外,人β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISA试剂盒在加入底物开始显色反应前,最好是先检查一下底物溶液的有效性,即可将A和B两种液各加一滴于清洁的空板孔或eppendorf管中,观察是否有显色出现,如有,则说明底物已变质。以OPD为底物,配好后应为无色,否则就不能使用。以TMB为底物,整个显色反应过程无需避光,而以OPD为底物,则需避光进行。关于TMB和OPD的显色反应特点及注意点可参考前面有关章节内容。显色反应完成后,加入酸终止反应,振荡混匀后即可进行下面的比色测定或肉眼判断结果。
1.3 正态分布及标准差 ELISA试验中,检验同一样本达20次以上时,就会发现这组数据(指测定结果的吸光值)分布在均值两侧,大部分集中在均值附近。如果以测定值为横坐标,以出现的频率为纵坐标作图,就可绘出一个呈钟形的曲线图。如图5-1,钟顶处为均值,其他值以均值为中心对称分布,这就是正态分布。 正态曲线以下的面积称概率,常用样本的均数(X)和标准差(SD)来表示,其计算方法如下: 均值、标准差和概率的关系如下: X±1SD,概率0.68 X±2SD,概率0.95 X±3SD,概率0.99 换言之,当ELSIA检测同一样本达一定次数后所得的一组数据,其中靠近均值(X)的±1SD范围内的数据,占该组数据的68%,在X±2SD范围内分布的数据占总体的95%,人β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISA试剂盒在X±3SD范围内分布的数据占总体的99%。当我们要求检验结果在X±2SD范围内为合格时,将有95%的数据可能合格。
优质的试剂,良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条
件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异,国内医学检验一般均用板式点。
本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点,珠式、管式及磁性球ELSIA,国外试
剂均与特殊仪器配合应用,两者均有详细的使用说明,严格遵照规定操作,必能得出
准确的结果。
人β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISA试剂盒相关产品系列表:
hz-E10946 人天青杀素(AZU)ELISA试剂盒 Human azurocidin,AZU ELISAkit
hz-E10947 人血管紧张肽酶A(ATA)ELISA试剂盒 Human Angiotensinase A,ATA ELISAkit
hz-E10948 人胰淀粉酶(PAMY)ELISA试剂盒 Human Pancreatic Amylase,PAMY ELISAkit
hz-E10949 人α烯醇化酶(αENOL)ELISA试剂盒 Human α-enolase,αENOL ELISAkit
hz-E10950 人胶原酶II(Collagenase II)ELISA试剂盒 Human Collagenase Type II ELISAkit
hz-E10951 人胶原酶I(Collagenase I)ELISA试剂盒 Human Collagenase I ELISAkit
hz-E10952 人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA试剂盒 Human phospho Protein Kinase C,P-PKC ELISAkit
hz-E10953 人乙酰胆碱酯酶(AChE)ELISA试剂盒 Human Acetylcholinesterase,AChE ELISAkit
hz-E10954 人葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA试剂盒 Human glucose oxidase,GOD ELISAkit
hz-E10955 人酪氨酸羟化酶(TH)ELISA试剂盒 Human tyrosine hydroxylase,TH ELISAkit
hz-E10956 人多巴胺脱羧酶(DDC)ELISA试剂盒 Human dopamine decarboxylase,DDC ELISAkit
hz-E10957 人非神经元性烯醇化酶(NNE)ELISA试剂盒 Human non-neuronal enolase,NNE ELISAkit
hz-E10958 人多巴胺-β羟化酶(DBH)ELISA试剂盒 Human dopamine-β-hydroxylase,DBH ELISAkit
hz-E10959 人胆碱乙酰化酶(CHAc)ELISA试剂盒 Human choline acetylase,CHAc ELISAkit
hz-E10960 人异柠檬酸脱氢酶(ICD)ELISA试剂盒 Human isocitrate dehydrogenase,ICD ELISAkit
hz-E10961 人胰蛋白酶原Ⅱ(Try-Ⅱ)ELISA试剂盒 Human Trypsinogen-2,Try-ⅡELISAkit
hz-E10962 人腺苷脱氨酶(ADA)ELISA试剂盒 Human adenosine deaminase,ADA ELISAkit
hz-E10963 人透明质酸酶(HAase)ELISA试剂盒 Human Hyaluronidase,HAase ELISAkit
hz-E10964 人天门冬氨酸氨基转移酶(AST)ELISA试剂盒 Human Aspartate aminotransferase,AST ELISAkit
hz-E10965 人酸性磷酸酶(ACP)ELISA试剂盒 Human Acid Phosphatase,ACP ELISAkit
hz-E10966 人葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)ELISA试剂盒 Human glucose-6-phosphate isomerase,GPI ELISAkit
hz-E10967 人磷酸葡萄糖变位酶(PGM)ELISA试剂盒 Human Phosphoglucomutase,PGM ELISAkit
hz-E10968 人亮氨酰氨基肽酶(LAP)ELISA试剂盒 Human Leucine aminopepridase,LAP ELISAkit
hz-E10969 人链激酶(SK)ELISA试剂盒 Human Streptokinase,SK ELISAkit