在小鼠WNT1诱导信号通道蛋白1(WISP1)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,小鼠WNT1诱导信号通道蛋白1(WISP1)检测试剂盒观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠WNT1诱导信号通道蛋白1(WISP1)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠WNT1诱导信号通道蛋白1(WISP1)检测试剂盒相关如下:
ELISA Kit for Juxtanodin (JN) 人Juxtanodin蛋白(JN)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Dermokine (DMKN) 人Dermokine蛋白(DMKN)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Dihydrodiol Dehydrogenase 2 (DDH2) 人二氢二醇脱氢酶2(DDH2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Semaphorin 4B (SEMA4B) 人信号素4B(SEMA4B)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Defensin Beta 126 (DEFb126) 人防御素β126(DEFβ126)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Cadherin 26 (CDH26) 人钙黏蛋白26(CDH26)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Defensin Beta 124 (DEFb124) 人防御素β124(DEFβ124)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Defensin Beta 131 (DEFb131) 人防御素β131(DEFβ131)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Angiotensin 1-7 (Ang1-7) 人血管紧张素1-7(Ang1-7)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Peptide YY 3 (PYY3) 人YY肽3(PYY3)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for NADH Dehydrogenase 5 (ND5) 人NADH脱氢酶5(ND5)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Angiotensin 1-9 (Ang1-9) 人血管紧张素1-9(Ang1-9)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Interferon Alpha 2 (IFNa2) 人干扰素α2(IFNα2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Ribonuclease H (RNASEH) 人核糖核酸酶H(RNASEH)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Tyrosinase (TYR) 人酪胺酸酶(TYR)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Latrophilin 3 (LPHN3) 人蛛毒素受体3(LPHN3)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Synaptophysin (SYP) 人突触素(SYP)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Desmoglein 3 (DSG3) 人桥粒芯糖蛋白3(DSG3)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Mineralocorticoid Receptor (MR) 人盐皮质激素受体(MR)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Keratin 5 (KRT5) 人角蛋白5(KRT5)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Keratin 7 (KRT7) 人角蛋白7(KRT7)检测试剂盒96t/48t