在小鼠赖氨酰氧化酶(LOX)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取小鼠赖氨酰氧化酶(LOX)检测试剂盒“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠赖氨酰氧化酶(LOX)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠赖氨酰氧化酶(LOX)检测试剂盒相关如下:
Porcine gastrin receptor,GsaR ELISAkit 猪促胃液素受体(GsaR)检测试剂盒96t/48t
Porcine growth hormone releasing peptide- 猪生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)检测试剂盒96t/48t
Porcine Dexamethasone,Dex ELISAkit 猪地塞米松(Dex)检测试剂盒96t/48t
Porcine D-Dimer,D2D ELISAkit 猪D二聚体(D2D)检测试剂盒96t/48t
Porcine myeloperoxidase,MPO ELISAkit 猪髓过氧化物酶(MPO)检测试剂盒96t/48t
Porcine Super Oxidase Dimutase,SOD ELISAkit 猪超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒96t/48t
Porcine von Willebrand Factor,vWF ELISAkit 猪血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)检测试剂盒96t/48t
Porcine melanoma metastasis surface adhesion molecule,MMSAM 猪黑色素瘤转移表面黏附分子(MMSAM)检测试剂盒96t/48t
Porcine soluble vascular endothelial growth 猪可溶性血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/sFLK-1)检测试剂盒96t/48t
Porcine Vascular Endothelial-Cadherin Complex,VE-cad ELISAkit 猪血管内皮钙粘着蛋白复合体(VE-cad)检测试剂盒96t/48t
Porcine Noradrenaline,NE ELISAkit 猪去甲肾上腺素(NE)检测试剂盒96t/48t
Porcine angiotension Ⅱ,ANG-Ⅱ ELISAkit 猪血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)检测试剂盒96t/48t
Porcine Factor-related Apoptosis,FAS ELISAkit 猪凋亡相关因子(FAS/CD95)检测试剂盒96t/48t
Porcine B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2 ELISAkit 猪B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)检测试剂盒96t/48t
Porcine Bcl-2 Assaciated X protein,BAX ELISAkit 猪Bcl-2相关X蛋白(BAX)检测试剂盒96t/48t
Porcine Hydrocortisone,HYD ELISAkit 猪氢化可的松(HYD)检测试剂盒96t/48t
Porcine nitric oxide,NO ELISAkit 猪一氧化氮(NO)检测试剂盒96t/48t
Porcine Endothelial nitric oxide synthase,eNOS ELISAkit 猪内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)检测试剂盒96t/48t
Porcine Endothelial nitric oxide synthase 3,eNOS-3 ELISAkit 猪内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)检测试剂盒96t/48t
Porcine Angiopoietin 2,ANG-2 ELISAkit 猪血管生成素2(ANG-2)检测试剂盒96t/48t
Porcine tyrosine 猪血管生成素受体/含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶2(Tie-2)检测试剂盒96t/48t