在小鼠钠/钾离子转运ATP酶α2肽(ATP1α2)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,小鼠钠/钾离子转运ATP酶α2肽(ATP1α2)检测试剂盒在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠钠/钾离子转运ATP酶α2肽(ATP1α2)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠钠/钾离子转运ATP酶α2肽(ATP1α2)检测试剂盒相关如下:
Human Collagen-like Bioprotein Ⅱ,HCBⅡ ELISAkit 人胶原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)检测试剂盒96t/48t
Human Secretin ELISAkit 人促胰液素/胰泌素(Secretin)检测试剂盒96t/48t
Human Peptide YY ELISAkit 人多肽YY(Peptide-YY)检测试剂盒96t/48t
Human gastrin receptor,GsaR ELISAkit 人促胃液素受体(GsaR)检测试剂盒96t/48t
Human cholecystokinin octapeptide,CCK-8 ELISAkit 人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)检测试剂盒96t/48t
Human trypsinogen activation peptide,TAP ELISAkit 人胰蛋白酶原激活肽(TAP)ELISA
Human α1-Acid glycoprotein,α1-AGP ELISAkit c
Human α1-Acid glycoprotein,α1-AGP ELISAkit 人内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)检测试剂盒96t/48t
Human malondialchehyche,MDA ELISAkit 人丙二醛(MDA)检测试剂盒96t/48t
Human Amylin ELISAkit 人胰淀素(Amylin)检测试剂盒96t/48t
Human Motilin,MTL ELISAkit 人血管活性肠肽(VIP)检测试剂盒96t/48t
Human cholecystokinin,CCK ELISAkit 人胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)检测试剂盒96t/48t
Human N-terminal procollagen Ⅲ propeptide,PⅢNP ELISAkit 人Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)检测试剂盒96t/48t
Human Collagen Type Ⅱ,Col Ⅱ ELISAkit 人Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)检测试剂盒96t/48t
Human Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ ELISAkit 人Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)检测试剂盒96t/48t
Human procollagen Ⅲ N-terminal peptide,PⅢNT ELISAkit 人Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)检测试剂盒96t/48t
Human Hyaluronic acid,HA ELISAkit 人透明质酸(HA)检测试剂盒96t/48t
Human Collagen Type Ⅳ,Col Ⅳ ELISAkit 人Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)检测试剂盒96t/48t
Human Collagen Type Ⅲ,Col Ⅲ ELISAkit 人Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)检测试剂盒96t/48t