在小鼠胃蛋白酶原C(PGC)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 小鼠胃蛋白酶原C(PGC)检测试剂盒酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠胃蛋白酶原C(PGC)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠胃蛋白酶原C(PGC)检测试剂盒相关如下:
rabbit platelet activating factor,PAF ELISAkit 兔子血小板活化因子(PAF)检测试剂盒96t/48t
rabbit thrombomodulin,TM ELISAkit 兔子血栓调节蛋白(TM)检测试剂盒96t/48t
rabbit Fibrinogen Degradation Product,FDP ELISAkit 兔子血纤蛋白原降解产物(FDP)检测试剂盒96t/48t
rabbit plasminogen activator inhibitor,PAI ELISAkit 兔子纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)检测试剂盒96t/48t
rabbit plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1 ELISAkit 兔子纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)检测试剂盒96t/48t
rabbit intercellular adhesion molecule 3,ICAM-3 ELISAkit 兔子细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)检测试剂盒96t/48t
Rabbit Glucose dependent insulin releasing polypeptide,GIP 兔子葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)检测试剂盒96t/48t
rabbit intercellular adhesion molecule 2,ICAM-2 ELISAkit 兔子细胞间粘附分子2(ICAM-2/CD102)检测试剂盒96t/48t
rabbit intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1/CD54 ELISAkit 兔子细胞间粘附分子1(ICAM-1/CD54)检测试剂盒96t/48t
rabbit Hyaluronic acid,HA ELISAkit 兔子透明质酸(HA)检测试剂盒96t/48t
rabbit Leptin,LEP ELISAkit 兔子瘦素(LEP)检测试剂盒96t/48t
rabbit neurotrophin 4,NT-4 ELISAkit 兔子神经营养因子4(NT-4)检测试剂盒96t/48t
rabbit neurotrophin 3,NT-3 ELISAkit 兔子神经营养因子3(NT-3)检测试剂盒96t/48t
rabbit Neuron-specific enolase,NSE ELISAkit 兔子神经特异性烯醇化酶(NSE)检测试剂盒96t/48t
rabbit Nerve growth factor,NGF ELISAkit 兔子神经生长因子(NGF)检测试剂盒96t/48t
rabbit Dehydroepiandrosterone sulfate,DHEA-S ELISAkit 兔子脱氢表雄酮硫酸酯(DHEA-S)检测试剂盒96t/48t
Rabbit myelin basic protein,MBP ELISAkit 兔子髓磷脂碱性蛋白(MBP)检测试剂盒96t/48t
rabbit Prostaglandin E2,PG-E2 ELISAkit 兔子前列腺素E2(PGE2)检测试剂盒96t/48t
rabbit Prostaglandin E1,PGE1 ELISAkit 兔子前列腺素E1(PGE1)检测试剂盒96t/48t