小鼠脂多糖结合蛋白(LBP)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。小鼠脂多糖结合蛋白(LBP)检测试剂盒然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
小鼠脂多糖结合蛋白(LBP)检测试剂盒实验原理
应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠脂多糖结合蛋白(LBP)检测试剂盒相关如下:
Rat intestinal fatty acid binding protein,iFABP ELISAkit 大鼠肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)检测试剂盒96t/48t
Rat telomerase,TE ELISAkit 大鼠端粒酶(TE)检测试剂盒96t/48t
Rat matrix metalloproteinase 5,MMP-5 ELISAkit 大鼠基质金属蛋白酶5(MMP-5)检测试剂盒96t/48t
Rat matrix metalloproteinase 4,MMP-4 ELISAkit 大鼠基质金属蛋白酶4(MMP-4)检测试剂盒96t/48t
Rat matrix metalloproteinase 9/Gelatinase 大鼠基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B) 检测试剂盒96t/48t
Rat tissue inhibitors of metalloproteinase 1,TIMP-1 ELISAkit 大鼠基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)检测试剂盒96t/48t
Rat basic fibroblast growth factor,bFGF ELISAkit 大鼠碱性成纤维生长因子(bFGF)检测试剂盒96t/48t
Rat macrophage inflammatory protein 5,MIP-5 ELISAkit 大鼠巨噬细胞炎症蛋白5(MIP-5)检测试剂盒96t/48t
Rat Soluble Intercellular Adhesion Molecule 1,sICAM-1 大鼠可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)检测试剂盒96t/48t
Rat soluble Vascuolar cell adhesion molecule 1,sVCAM-1 大鼠可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)检测试剂盒96t/48t
Rat Immunoglobulin A,IgA ELISAkit 大鼠免疫球蛋白A(IgA)检测试剂盒96t/48t
Rat Immunoglobulin E,IgE ELISAkit 大鼠免疫球蛋白E(IgE)检测试剂盒96t/48t
Rat Immunoglobulin G,IgG ELISAkit 大鼠免疫球蛋白G(IgG)检测试剂盒96t/48t
Rat Immunoglobulin M,IgM ELISAkit 大鼠免疫球蛋白M(IgM)检测试剂盒96t/48t
Rat Endostatin,ES ELISAkit 大鼠内皮抑素(ES)检测试剂盒96t/48t
Rat brain natriuretic peptide,BNP ELISAkit 大鼠脑钠素/脑钠尿肽(BNP)检测试剂盒96t/48t
Rat Prostaglandin E2,PG-E2 ELISAkit 大鼠前列腺素E2(PGE2)检测试剂盒96t/48t
Rat Neuron-specific enolase,NSE ELISAkit 大鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)检测试剂盒96t/48t
Rat intercellular adhesion molecule 2,ICAM-2 ELISAkit 大鼠细胞间粘附分子2(ICAM-2/CD102)检测试剂盒96t/48t
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