细胞培养基的基本成分
液体培养基保存:液体培养基应于4℃冰箱避光保存,实验前放入37℃预热。未加血清液体培养基有效期为12 个月。液体培养基中的L-谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解。如果细胞生长不良,可以再添加适量L-谷氨酰胺。
干粉培养基保存:非洲绿猴sv40转化的肾细胞4℃冰箱避光保存,有效期36 个月。
血清:细胞培养液中添加的血清有牛血清、马血清、人血清等,其中牛血清是最常用的血清,分为胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是从母牛破腹取出的胎牛中分离出的血清,价格昂贵。新生小牛血清是从刚出生的尚未哺乳的小牛中分离出来的血清,如厂家能做到这一点,新生小牛血清的质量与胎牛血清的质量相差不大。如小牛出生后已哺乳,从这种小牛中取出的血清中可能含有较多的生物活性物质,其质量明显不如前两种。
血清的质量,种非洲绿猴sv40转化的肾细胞类及使用的浓度都有可能影响细胞的生长,而不同批次的血清支持细胞生长的能力也不同,尤其是对克隆细胞的生长,某些批次血清可能含有毒性或抑制细胞生长的物质。因此,在购买大量血清之前,必须对血清支持细胞生长能力进行检测,然后再大量购买质量好的同一批号的血清,并注意以下几点:
(1)需要长期保存的血清必须储存于-20℃ – 70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1 个月。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。
(2)一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。
(3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室温,待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。
(4)热灭活是指56℃, 30 分钟加热已完全解非洲绿猴sv40转化的肾细胞冻的血清。加热过程中須規則搖晃均勻。此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活。除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量。补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。
(5)切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量。
(6)血清中的沉淀物
絮状物:主要是血非洲绿猴sv40转化的肾细胞清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm, 5 分钟去除,也可不用处理。
显微镜下“小黑点”:经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象“小黑点”,常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。
hz-E11446 人血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISA试剂盒 Human thrombospondin 1,TSP-1 ELISAkit
hz-E11447 人血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISA试剂盒 Human alpha-granular membrane protein,GMP-140 ELISAkit
hz-E11448 人末端补体复合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA试剂盒 Human terminal complement complex C5b-9,TCC C5b-9 ELISAkit
hz-E11449 人补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒 Human Complement 4,C4 ELISAkit
hz-E11450 人补体蛋白3(C3)ELISA试剂盒 Human Complement 3,C3 ELISAkit
hz-E11451 人凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA试剂盒 Human coagulation factor Ⅱ,FⅡ ELISAkit
hz-E11452 人类白细胞抗原B27(HLA-B27)ELISA试剂盒 Human leucocyte antigen B27,HLA-B27 ELISAkit
hz-E11453 人结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)ELISA试剂盒 Human Haptoglobin,Hpt/HP ELISAkit
hz-E11454 人血清总补体(CH50)ELISA试剂盒 Human 50% complement hemolysis,CH50 ELISAkit
hz-E11455 人过敏毒素/补体片断4(C4a)ELISA试剂盒 Human Complement fragment 4a,C4a ELISAkit
hz-E11456 人补体片断5a(C5a)ELISA试剂盒 Human Complement fragment 5a,C5a ELISAkit
hz-E11457 人补体片断3a(C3a)ELISA试剂盒 Human Complement fragment 3a,C3a ELISAkit
hz-E11458 人凝血因子Ⅷ相关抗原(Ⅷ-Ag)ELISA试剂盒 Human coagulation factor Ⅷ related antigen,FⅧ-Ag ELISAkit
hz-E11459 人凝血因子Ⅸ(FⅨ)ELISA试剂盒 Human coagulation factor Ⅸ,FⅨ ELISAkit
hz-E11460 人凝血因子Ⅹ(FⅩ)ELISA试剂盒 Human coagulation factor Ⅹ,FⅩ ELISAkit
hz-E11461 人血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)ELISA试剂盒 Human von Willebrand Factor,vWF ELISAkit
hz-E11462 人纤溶酶抗纤溶酶复合物(PAP)ELISA试剂盒 Human plasmin-antiplasmin complex,PAP ELISAkit
hz-E11463 人凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒 Human thrombin-antithrombin complex,TAT ELISAkit
hz-E11464 人抗凝血酶受体(ATR)ELISA试剂盒 Human anti-thrombin receptor,ATR ELISAkit
hz-E11465 人凝血酶受体(TR)ELISA试剂盒 Human thrombin receptor,TR ELISAkit
hz-E11466 人第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISA试剂盒 Human Factor Ⅷ-related Antigen,FⅧAg ELISAkit
hz-E11467 人血纤蛋白原(Fbg)ELISA试剂盒 Human Fibrinogen,Fbg ELISAkit
hz-E11468 人主要组织相容性复合体Ⅰ类(MHCⅠ/HLAⅠ)ELISA试剂盒 Human major histocompatibility complex Ⅰ,MHCⅠ/HLAⅠ ELISAkit
hz-E11469 人抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA试剂盒 Human Anti-Thrombin Ⅲ,AT-Ⅲ ELISAkit
hz-E11470 人血栓前体蛋白(TpP)ELISA试剂盒 Human thrombus precursor protein,TpP ELISAkit
hz-E11471 人淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISA试剂盒 Human lymphocyte function associated antigen 3,LFA-3 ELISAkit
hz-E11472 人主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHCⅢ/HLA-Ⅲ)ELISA试剂盒 Human major histocompatibility complex Ⅲ,MHCⅢ/HLA-