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129小鼠ES细胞

129小鼠ES细胞

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品牌:ATCC

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细胞培养基的基本成分

 

液体培养基保存:液体培养基应于4℃冰箱避光保存,实验前放入37℃预热。未加血清液体培养基有效期为12 个月。液体培养基中的L-谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解。如果细胞生长不良,可以再添加适量L-谷氨酰胺。

干粉培养基保存:129小鼠ES细胞4℃冰箱避光保存,有效期36 个月。

血清:细胞培养液中添加的血清有牛血清、马血清、人血清等,其中牛血清是最常用的血清,分为胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是从母牛破腹取出的胎牛中分离出的血清,价格昂贵。新生小牛血清是从刚出生的尚未哺乳的小牛中分离出来的血清,如厂家能做到这一点,新生小牛血清的质量与胎牛血清的质量相差不大。如小牛出生后已哺乳,从这种小牛中取出的血清中可能含有较多的生物活性物质,其质量明显不如前两种。

血清的质量,种类及使用的浓度都有可能影响细胞的生长,而不同批次的血清支持细胞生长的能力也不同,尤其是对克隆细胞的生长,某些批次血清可能含有毒性或抑制细胞生长的物质。因此,在购买大量血清之前,必须对血清支持细胞生长能力进行检测,然后再大量购买质量好的同一批号的血清,并注意以下几点:

1)需要长期保存的血清必须储存于-20 70 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1 个月。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。

2)一般厂商提供的血清为无菌,无需129小鼠ES细胞再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。

3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20 -70 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室温,待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。

4)热灭活是指56, 30 分钟加热已完全解冻的血清。加热过程中須規則搖晃均勻。此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活。除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量。补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强129小鼠ES细胞吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。

5)切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量。

6)血清中的沉淀物

絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm, 5 分钟去除,也可不用处理。

显微镜下“小黑点”:经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象“小黑点”,常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另129小鼠ES细胞一批号的血清。

//     (舌鳞癌细胞,Tca-8113细胞    

//     (卵巢癌细胞,HO-8910细胞    

CCL-240     (急性粒细胞白血病细胞) HL-60 细胞    

HTB-52     (肝癌细胞,SK-HEP-1细胞    

HTB-3     (膀胱鳞癌细胞,SCaBER细胞    

//     ( 胚肾细胞,)  AAV-293细胞    

CRL-1651      转化的非洲绿猴肾细胞,COS-7(SV40细胞    

CHO     中国仓鼠卵巢细胞,CHO细胞    

T47-D     乳腺管癌 T47-D细胞    

Hacat     人正常皮肤细胞,Hacat细胞    

Human BGC-823     人胃腺癌细胞(低分化) Human   BGC-823细胞    

BT474      人乳腺导管癌细胞,BT474细胞    

rwpe2     人前列腺正常细胞,rwpe2细胞    

CRL-1573      人胚肾细胞,293 [HEK-293] 细胞    

HCT-8     人结肠癌细胞,HCT-8细胞    

hep 3B     人肝癌细胞,hep 3B细胞    

HCT-8     回盲肠腺癌 HCT-8细胞    

U266     骨髓瘤细胞株 U266细胞    

HCCLMS      肝转移癌 HCCLMS细胞    

BB7.2     分泌A2抗体B淋巴细胞,BB7.2细胞    

BGC-823     低分化胃腺癌 BGC-823细胞    

NRK-52E       大鼠肾细胞,NRK-52E细胞    







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