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人永生化表皮细胞 HaCaT细胞

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培养人永生化表皮细胞 HaCaT细胞操作

1. 器械和器皿

器械：外科剪、镊子、虹膜剪等、小剪刀、细镊子和虹膜小刀等

各种金属器械如解剖器械，使用后及时刷洗干净，用酒精棉球擦拭后晾干，或经60°C烘干，以防生锈。由于湿热消毒对手术器械容易可用70－80％酒精浸泡1小时以上消毒。

器皿：1) 玻璃瓶及相人永生化表皮细胞 HaCaT细胞应的胶塞或胶木螺旋盖

用于分装血清、多聚赖氨酸、解剖液、各种盐溶液和培养液等。

2)用培养瓶、盖玻片

培养用的盖玻片必须不含铅、不发霉，可用0.2N盐酸浸泡10分钟，用蒸馏水洗2次，每次10分钟，然后移入丙酮或乙醇浸泡10分钟，再用双蒸水洗2次，每次10分钟，烘干待消毒。凡组织学用过的旧盖玻片一般不用。

3) 移液管、吸管、烧杯、离心管和培养皿。

4) 塑料培养皿（35mm）、塑料培养板（6、24、96孔）。

辅助工具：放置试管、吸管和玻璃瓶等的架子。

细胞识别，根据细胞外形及人永生化表皮细胞 HaCaT细胞内部结构进行细胞的识别。神经细胞具有显著的特征，培养中的贴壁的神经元突起很明显，特别是树突由粗而细，有分支，突起的末端有膨大的人永生化表皮细胞 HaCaT细胞生长锥结构，正在不断变化；细胞体呈圆形、梭形、三角形或多角形不等，胞体较厚，具有空泡状核，有明显的核仁；立体感强，常见“晕”。培养细胞中可包括几种神经元的类型和非神经元的“背景细胞”，即成纤维细胞、室管膜细胞和几种胶质细胞。成纤维细胞贴壁最快，呈扁平状，胞核卵园形，有并列的两粒小核仁，从胞体两端发出细长突起。胶质细胞贴附在胶原上和成纤维细胞形成一层“地毯”。神经细胞贴壁较慢，落在“地毯”上生长迁移和分化。

培养的神经细胞可按一般Nissl法染色或免疫细胞化学特异性染色加以鉴别。

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