尿素变性PAGE上样液实验要点
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2.在最适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚和氯仿的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(苯酚—氯仿—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。尿素变性PAGE上样液小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
尿素变性PAGE上样液注意
1. 对大肠杆菌可从固体培养基上挑取单个菌落直接进行煮沸法提取质粒DNA。
2. 煮沸法中添加溶菌酶有一定限度,浓度高时,细菌裂解效果反而不好。有时不同溶菌酶也能溶菌。
3. 提取的质粒DNA 中会含有RNA,但RNA 并不干扰进一步实验,如限制性内切酶消化,亚克隆及连接反应等。
尿素变性PAGE上样液其它产品信息:
100424 盐酸普鲁卡因 对照品 HPLC法含量测定
100425 维生素C 对照品 含量测定用
100426 盐酸金刚烷胺 对照品 供鉴别用
100427 盐酸溴己新 对照品 HPLC法含量测定用
100428 美索巴莫 对照品 HPLC法含量测定用
100429 氨苯蝶啶 对照品 HPLC法含量测定用
100430 羟甲烟胺 对照品 UV法溶出度检查
100431 尿囊素 对照品 含量测定
100432 枸橼酸喷托维林 对照品 HPLC法含量测定
100433 苯甲酸钠 对照品 HPLC含量测定
100434 烟酸 对照品 HPLC法含量测定用
100438 帕司烟肼(对氨基水杨酸异烟肼) 对照品 UV法溶出度检查
100439 曲匹布通 对照品 UV法含量测定用
100440 曲匹地尔 对照品 TLC法检查用
100441 桂美酸 对照品 UV法溶出度检查
100442 奥拉米特 对照品 UV法溶出度检查用
100444 对羟基苯甲酸丙酯 对照品 HPLC检查
100446 贝美格 对照品 含量测定(HPLC)
100452 罗通定 对照品 HPLC含量测定
100453 硫酸氢小檗碱 对照品 含量测定(HPLC)
100454 苯佐卡因 对照品 含量测定(HPLC)
100455 度米芬 对照品 HPLC法含量测定
100456 盐酸丁卡因 对照品 HPLC法含量测定用
100462 新鱼腥草素钠 对照品 含量测定(HPLC)
100463 木糖醇 对照品 TLC法含量测定
100465 甲基斑蝥胺 对照品 HPLC法含量测定
100466 呋喃唑酮 对照品 HPLC法含量测定用
100468 替加氟 对照品 HPLC法含量测定
100469 尿嘧啶 对照品 HPLC法含量测定