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荧光RT-PCR法,本标准适用:3.1 荧光PT-PCR荧光反转录聚合酶连反应 3.2 CT值每个反应管内的银光信号量达到设定的数值时所经历的循环圈数。 3.3RNA核糖核酸 3.4Taq酶Taq RNA聚合酶 3.5PBS磷酸盐缓冲生理盐水 3.6DEPC焦炭酸乙二酯 原理:采用TaqMan方法,在比对新城病毒F基因序列的基础上,设置针对F基因的特异性引物和特异性的荧光双标记探针进行配对,探针5端标记FAM荧光素为报告荧光基团(用R表示),3端标记Tampa荧光素为淬灭荧光基团(用Q表示),它的近距离内能吸收5端荧光基团发出的荧光信号。PCR反应进入退火阶段时,引物和探针同时与目的片段基因进行结合,此时探针上R基团发出的荧光信号被Q基团所吸收,仪器检测不到荧光信号,而反应进行到延伸阶段时,Taq酶的5-3的外切核酸酶功能将探针降解,这样探针上的R基团游离出来,所发出的荧光不再为Q基团所吸收而被检测仪所接收,随着PCR反应的循环进行,PCR产物与荧光信号的增长呈现对应关系