ATCC 51191 具核梭杆菌动物亚种的微生物培养方法！

                 ATCC 51191 具核梭杆菌动物亚种的微生物培养方法！

一、菌种简介

平台编号：Bio-79920

规格：Freeze-Dried

拉丁属名：Fusobacterium Nucleatum Subsp. Animalis

菌株名称：具核梭杆菌动物亚种

用途：ATCC原装进口

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、详细描述

Fusobacterium nucleatum subsp. animalis Gharbia and Shah拉丁名

(ATCC51191) 统一编号

Strain Designations 菌种别名 : NCTC 12276  

Type Strain 模式菌种 : yes  

Biosafety Level 生物安全等级 1

Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.

Product Format 提供形式 freeze-dried

Storage Conditions 保藏方法

Frozen（冷冻物）: -80℃ or colder

Freeze-Dried（冻干物）: 2℃ to 8℃

Live Culture（活物）: See Propagation Section

Preceptrol® no

Type Strain  模式菌种 yes Ref

Medium 培养基 ATCC Medium 1490: Modified chopped meat medium

Growth Conditions 生长条件

Temperature 培养温度: 37℃

Atmosphere 需氧情况: Anaerobic

Name of Depositor 寄存人 NCTC

Chain of Custody 来源国家 ATCC <-- NCTC

References 参考文献 Gharbia SE, Shah HN. Fusobacterium nucleatum subsp. fusiforme subsp. nov. and Fusobacterium nucleatum subsp. animalis subsp. nov. as additional subspecies within Fusobacterium nucleatum. Int. J. Syst. Bacteriol. 42: 296-298, 1992. PubMed: 1581188

Cross References

Nucleotide (GenBank) : AF342835 Fusobacterium nucleatum subsp. animalis strain ATCC 51191 16S ribosomal RNA gene, partial sequence; internal transcribed spacer 1, complete sequence; and 23S ribosomal RNA gene, partial sequence.

三、微生物菌种的培养

1、孢子制备

⑴ 放线菌孢子的制备

一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。

⑵ 霉菌孢子的制备

霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。

2、种子制备

⑴ 摇瓶种子制备

摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。

⑵ 种子罐种子制备

种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。

四、实验内容

1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

五、保藏方法

1、传代培养保藏法

又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。

2、液体石蜡覆盖保藏法

是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。

3、载体保藏法

是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4、寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5、冷冻保藏法

可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。

6、冷冻干燥保藏法

先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。

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