在临床应用中患者经常会同时使用多种药物,这些药物可能会产生药物-药物相互作用(Drug-drug interaction,DDI),最终导致严重不良反应或减弱治疗效果,因此,有必要对 DDI 发生的可能及其影响程度和严重性进行科学评估。药物相互作用按照发生机制可分为理化性质、代谢酶、转运体、靶点及疾病介导的相互作用,按照影响指标可分为药代动力学相互作用和药效动力学相互作用,而开展体外试验就是为了全面了解在研药物的药代动力学(Pharmacokinetics,PK)特征,以初步估计药代动力学相互作用的可能机制以及可能的严重程度,并支持 DDI 临床研究时机的确定。鉴于此,IPHASE作为体外研究生物试剂引领者,致力于开发CYP重组酶和ABC、SLC转运体产品,助力广大客户进行人源化体外药代动力学及可能潜在的 DDI 研究。
一、重组酶CYP2A6/ CYP2D6
药物代谢发生在肝脏、小肠、肾等组织中,肝脏是代谢的主要器官,其微粒体酶活性最强,其中最重要的氧化酶因其在还原状态下可与 CO 结合,在波长 450 nm 处有一最大吸收峰,故认为是细胞色素 P450 酶。位于肝脏内质网和线粒体内膜上的 CYP450 是参与药物Ⅰ相代谢的关键酶,经酶催化的氧化反应是药物体内代谢的主要途径,参与80%~90%药物的Ⅰ相代谢。因此,可通过检测 CYP450 酶活性,了解药物的体内代谢过程,预测药物疗效和不良反应。同时,《药物相互作用指导原则2020》也指出“申请人应在首次人体试验之前开展体外代谢研究,鉴定主要代谢产物,为临床前安全性数据外推到人体提供必要的信息,并为临床研究设计提供参考。
鉴于此,IPHASE作为体外研究生物试剂引领者,继研发CYP2C8、CYP2C9后,再次以HEK298细胞为载体,成功构建“CYP2A6+reductase+b5、CYP2D6+reductase+b5和CYP2D6+reductase”三种重组酶。IPHASE技术人员在4℃进行重组酶制备,并通过不同底物的代谢产物生成率来验证重组酶的活性。即IPHASE技术人员调整重组酶终浓度为25pmol/ ml,并分别以终浓度为0.8uM的香豆素和终浓度为0.4uM的右美沙芬为CYP2A6+reductase+b5和CYP2D6+reductase+b5、CYP2D6+reductase的底物,在37℃下将底物和重组酶共同孵育5min,结果显示底物均有代谢,并可得到其产物生成率,表明“CYP2A6+reductase+b5、CYP2D6+reductase+b5和CYP2D6+reductase”这三种重组酶研发成功!
Recombinase | Marker Substrate Reaction | Rate |
CYP2A6+reductase+b5 | Coumarin | 64.5 pmol/min/mg protein |
CYP2D6+reductase | Dextromethorphane | 122.3 pmol/min/mg protein |
CYP2D6+reductase+b5 | Dextromethorphane | 273.9 pmol/min/mg protein |
同时,为表明重组酶活性,IPHASE技术人员以相同条件,使用自研产品和竞品同时进行上述试验,结果显示IPHASE CYP2A6+reductase+b5、CYP2D6+reductase+b5及CYP2D6+reductase三种重组酶验证活性均同竞品相似或高于竞品,表明IPHASE重组酶活性较好,满足客户需求!
二、转运体OATP1B1/OATP1B3
转运体在人体全身组织中均有表达,通过影响药物的吸收、分布和消除而影响药物的药代动力学和药效学特征。根据功能可将转运体分为摄入型转运体(SLC)和外排型转运体(ABC)。OATP1B1和OATP1B3属于SLC家族,是肝细胞窦状隙膜上表达的主要摄取转运体,在多种药物的肝脏摄取中发挥重要作用。OATP1B1、OATP1B3的底物众多,很多在结构上不相关的药物也会经由其转运,因此,在体外研究其与化合物的关系至关重要!目前已明确属于OATP1B1及OATP1B3的底物、抑制剂及诱导剂如下所示:
基因符号-SLCO1B1
底物:阿托伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、罗舒伐他汀、辛伐他汀酸、依那普利、非索非那定、甲氨蝶呤、缬沙坦、波生坦、奥美沙坦、阿曲生坦、利福平、SN-38、伊立替康、头孢托仑、瑞格列奈、西罗莫司、杀奎那韦、洛匹那韦、头孢哌酮、头孢唑林及托拉塞米;
抑制剂:环孢素、吉非贝齐、利福平、罗红霉素、泰利霉素、利托那韦、杀奎那韦、奈非那韦、西地那非、阿托伐他汀酸、辛伐他听、辛伐他汀酸、阿托伐他汀酯、洛伐他汀、洛伐他汀酸、格列本脲、贯叶金丝桃素、紫杉醇、瑞格列奈、替米沙坦、他克莫司、曲格列酮;
诱导剂:双氯芬酸、布洛芬、罗美昔布;
基因符号-SLCO1B3
底物:波生坦、地高辛、依那普利、红霉素、非索非那定、氟伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、罗舒伐他汀、利福平、奥美沙坦、替米沙坦、阿曲生坦、缬沙坦、伊马替尼、甲氨蝶呤、紫杉醇、多烯紫杉醇、CCK-8、头孢拉定、头孢唑林、头孢美唑、头孢托仑、头孢氨苄、萘夫西林;
抑制剂:环孢素、利福平、红霉素、罗红霉素、克拉霉素、泰利霉素;
诱导剂:双氯芬酸、布洛芬、罗美昔布;
资料来源:有机阴离子转运多肽OATP1B1、OATP1B3 的基因多态性及其介导的药物相互作用研究进展
鉴于此,IPHASE继成功研发转运体MATE2-K、OAT1、OAT3和OCT2后,再次以HEK293为细胞载体,成功构建瞬时转染重组OATP1B1、OATP1B3转运体。IPHASE技术人员以终浓度为1 μM的普伐他汀钠(Deoxycholic acid, sodium salt)为底物,通过LC-MS/MS检测空载细胞HEK293和转运体细胞OATP1B1、OATP1B3细胞对普伐他汀钠的代谢能力,结果显示转运体细胞OATP1B1底物代谢量为HEK293细胞底物代谢量的13倍,OATP1B3则为34倍!均远高于《药物相互作用指导原则2020》规定的2倍,表明OATP1B1和OATP1B3转运体细胞模型构建成功!
三、IPHASE相关产品
除了最新研发的重组酶CYP2A6和转运体OATP1B1、OATP1B3细胞,IPHASE作为体外研究生物试剂引领者,相继开发出了多种重组酶及转运体细胞相关产品,助力广大客户体外研究。
分类 | 产品名称 | 规格 |
CYP重组酶 | CYP2A6+reductase+b5 | 0.5mL, 0.5nmol |
CYP2D6+reductase | 0.5mL, 0.5nmol | |
CYP2D6+reductase+b5 | 0.5mL, 0.5nmol | |
CYP2C8+reductase+b5 | 0.5mL, 0.5nmol | |
CYP2C9+reductase+b5 | 0.5mL, 0.5nmol | |
UGT重组酶 | UGT1A1 | 0.5mL,5mg/mL |
UGT1A3 | 0.5mL,5mg/mL | |
UGT1A4 | 0.5mL,5mg/mL | |
UGT1A6 | 0.5mL,5mg/mL | |
UGT1A9 | 0.5mL,5mg/mL | |
UGT1A10 | 0.5mL,5mg/mL | |
UGT2B17 | 0.5mL,5mg/mL | |
转运体细胞 | OATP1B1细胞 | 8-10 million cells |
OATP1B3细胞 | 8-10 million cells | |
OAT1细胞 | 8-10 million cells | |
OAT3细胞 | 8-10 million cells | |
OCT2细胞 | 8-10 million cells | |
MATE2-K细胞 | 8-10 million cells |
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