视频回放|第二届“分子互作创新技术与前沿应用”网络研讨会成功召开（附Q&A合集）

仪器信息网讯  2024年6月5日，仪器信息网举办的“第二届分子互作创新技术与前沿应用”主题网络研讨会圆满落幕，特别邀请12位来自知名高校、科研院所、科学仪器企业的专家学者，围绕SPR、BLI、MST、ITC、FIDA、AUC和BiFC等分子互作创新技术，从抗体研发、中药活性发现、药物靶标研究，再到分子互作传感器、高通量分子相互作用分析等前沿应用展开深入探讨，本次会议共吸引逾1500人次业内相关人员观看。

应广大用户要求，会议主办方经征得报告嘉宾同意，特剪辑整理会议视频回放特辑，供从业人员观看学习。（部分报告内容不便回放，敬请谅解！）

报告期间Q&A合集汇总（仅限文字答疑部分）

Q1：一般设置多少温度用于检测蛋白互作？

樊峥：老型号的仪器无法降温控制，只能设置室温以上温度，新型号的设备可以控温，一般设置为室温，可根据具体实验要求调控温度。

Q2：样品无损失，可回收的话，还可以使用吗？

樊峥：可以的。

Q3：请教表位竞争实验孔板的排布设计，7X7的矩阵为什么H行还要设计不同的抗体？

樊峥：H行抗体可以作为单独抗体结合的对照。

Q4：SA传感器，loading生物素化FcRn,想问一下信号一直掉该怎么优化条件呢？

樊峥：SA传感器信号不稳的常见原因是生物素的问题。

Q5：检测小分子与蛋白之间的互作一般推荐使用哪种传感器？

樊峥：小分子一般建议用SSA传感器。

Q6：请问各位老师：1）.不同抗体，分子大小一样，loading高度一致，和同一个抗原的反应的response高度不一致，这个可能是什么因素引起的，亲和力，表位？

2）.根据我的一些项目数据，同样的样品，在SPR和BLI检测出来的亲和力数据不太一致，尤其在亲和力比较高的样品里，往往BLI测出来的亲和力会高出一个数量级，这个现象你们有了解不，我该相信哪个数据。

3）.我们测亲和力一般是在25度反应，为什么不在生理条件，比如37度去做，这样更真实反映在人体内的结合解离情况？

张财辉:1）.抗体的分子构型是一致的吧？不同抗体的活性比例不一样，抗原的结合信号也就会不一样。

2）.由于分子互作是样品在特定的条件下的结合活性，因此不同的方法的比较需要在相同的条件下比较，不同方法会有一定差异，但不会特别多大，如果差异很大，可以把两种方法的实验条件和方法发给我们分析一下。

3）.一般体外动力学分析的温度设置25或37℃。

Q7：您好，请问在做亲和力动力学精确表征时浓度要选择几个呐，我看您的例子里有很多浓度都不足5个，这样也是可以的吗？

张财辉：动力学实验，一般浓度建议＞4个浓度，结果的准确性会更好。

Q8：通过BLI结果怎么判断化合物与蛋白是共价结合还是非供价结合？

张财辉：首先可以从分子的结构进行分析，如果化合物没有可形成共价的基团，则不可能是共价结合。如果是共价结合，在BLI上面会显示不解离，需要结合结构的信息综合评估。

Q9：NI NITA传感器固化那么低，为什么也能做小分子？

张财辉：不同his标签蛋白，与NTA结合的强弱差异很大，如果固化的牢固，且信号足够高，一般建议＞4nm，可以使用NTA传感器。

Q10：请问小分子化合物与核酸的互作适合吗？

张财辉：小分子和核酸的互作，一般会合成带biotin的核酸，然后用SA传感器固化生物素标记的核酸，分析与小分子的结合，有很多这个方向的文章发表了。

Q11：一个96孔板最多能够检测多少个单浓度样品？

张财辉：看机型，如果是16/96通道的，可以整块96孔板或384孔板都加样品，如果是2-8通道的机型，需要扣掉2-3列的缓冲液。

Q12：BLI和SPR都能检测动力学行为，请问什么场景选BLI，什么时候用SPR？

张财辉：SPR和BLI都是基于动力学的方式检测，SPR能够测试的样品，BLI都可以进行，由于BLI技术采用无流路的设计，对溶剂不敏感，因此粗样品，含有高浓度有机溶剂的样品，BLI检测效果更好。

Q13：请问在做小分子垂钓后想验证某一种物质的结合亲和力KD值，双扣除实验应该如何确定浓度范围？

王静：小分子浓度梯度范围一般可以从200uM到0.1uM。

Q14：BLI的靶点只能是蛋白吗？可以是细胞或者纳米颗粒吗？

王静：都可以。

Q15：固定到传感器上的Aβ是单体还是寡聚体？

王静：固定的是生物素修饰的单体。

Q16：MST不纯化的话，非特异结合影响不大吗？

王静：MST检测的是荧光标记的蛋白信号，没有荧光标记的蛋白不会被检测到。

Q17：用SPR做小分子单浓度筛选时，您提到的分子量矫正如何去做？

王静：在编辑方法时，把所有小分子的分子量输入进去，在分析数据时，在分析软件里点击分子量校正即可。

Q18：垂钓再生液有什么推荐的吗？Gly会影响打质谱吗

王静：垂钓中药靶点，再生可以用0.5% 三氟乙酸，做质谱时一般还会用超滤管进行超滤

张财辉：一般建议使用下游质谱能够兼容的缓冲液，比如0.5% PFA三氟乙酸等，如果是核酸样品，可以用NaCl，小分子结合弱，可以直接解离到PBST+DMSO缓冲液中。

Q19：请问SPR垂钓小分子容易造成仪器IFC损坏吗？过程中用的洗脱液和再生液可以相对固定是吗？

王静：垂钓小分子，洗脱液可以是5% DMSO PBS-T，或者0.5% 三氟乙酸。

Q20：请问毕老师您的仪器设计有基于目前市场哪个品牌吗？

毕研刚：原理是我们自己提出来的，全部工作都是我们自己开展的。具体原理可以查阅一些我们课题组发表的文章[1] 王大千. SPR 双分差动干涉成像阵列检测生物分子相互作用技术.北京:清华大学,2012

Q21：SPR能做细胞与药物分析时，细胞固化到芯片吗？

毕研刚：细胞是以贴壁的方式在芯片表面生长的，不需要固化。

Q22：固化细胞用什么技术？谢谢毕老师

毕研刚：不是固化，是自然沉降，贴壁的过程。

Q23：谢谢毕老师，还有一个怎么给药？

毕研刚：通过注射方式。

Q24：FIDA技术是怎么获得粘度呢？

张达威：是通过样品加入毛细管到检测器的扩散时间直接获得的。

Q25：溶液不纯也能检测吗？

张达威：可以的，对蛋白标记特定荧光即可。

Q26：不同压力下平衡曲线位移，代表的应该是不同压力下有不同的亲和力表现，如何跟kon koff联系起来？

张达威：可以参考一下FIDA的动力学note，在网站上可以下载到，非常巧妙的方式。

Q27：如果蛋白失活了对数据有什么影响？标记没有影响？

张达威：特定蛋白需要标签，可以提前表达荧光标签如GFP或者HIS标签。也可以标记配体，对混合样品进行梯度滴定。

Q28：请问这款国产SPR（S-CLASS高通量分子相互作用分析系统）能做单循环动力学模式吗？

陈雍硕:SCK模式已经在我们今年的研发计划中，很快就能正式上线。

Q29： ITC实验中，滴定针一直向样品池加入样品，样品池的样品会不断的被排出样品池，是这样吗？

吴萌：不是的，池子的体积以及加入的样品量都是有要求的，池子中的样品是不会被排出的。

问答互动环节1

问答互动环节2

分子互作交流群

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敬请期待，2025年第三届“分子互作创新技术与前沿应用”网络研讨会，会议内容及报告赞助请联系赵编辑 zhaoyw@instrument.com.cn

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