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仪器信息网讯 2024年6月5日,仪器信息网举办的“第二届分子互作创新技术与前沿应用”主题网络研讨会圆满落幕,特别邀请12位来自知名高校、科研院所、科学仪器企业的专家学者,围绕SPR、BLI、MST、ITC、FIDA、AUC和BiFC等分子互作创新技术,从抗体研发、中药活性发现、药物靶标研究,再到分子互作传感器、高通量分子相互作用分析等前沿应用展开深入探讨,本次会议共吸引逾1500人次业内相关人员观看。
应广大用户要求,会议主办方经征得报告嘉宾同意,特剪辑整理会议视频回放特辑,供从业人员观看学习。(部分报告内容不便回放,敬请谅解!)
“第二届分子互作创新技术与前沿应用”网络研讨会 2024年06月05日 |
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报告时间 |
报告主题 |
专家 |
单位 |
09:00-09:30 |
生物层干涉技术在抗体研发中的应用 |
樊峥 |
中国科学院微生物研究所 高级工程师 |
09:30-10:00 |
高通量分子互作Octet®在生物医药领域的应用『点击观看』 |
张财辉 |
赛多利斯 生物分析产品南区应用经理 |
10:00-10:30 |
分子相互作用技术在中药活性成分发现和靶标确认中的应用 |
王静 |
北京大学药学院 副主任技师/特聘副研究员 |
10:30-11:00 |
多维分子互作分析技术及应用介绍『点击观看』 |
张达威 |
普瑞麦迪(北京)实验室技术有限公司 产品总监 |
11:00-11:30 |
分析超速离心技术在生物分子相互作用研究中的应用 |
李文奇 |
清华大学 蛋白质研究技术中心蛋白质制备与鉴定平台主管/高级工程师 |
11:30-12:00 |
荧光互补技术在分子互作研究中的应用 |
陈明海 |
中国科学院深圳先进技术研究院 副研究员 |
12:00-13:30 |
午休时间 |
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13:30-14:00 |
表面等离子体共振技术——原理、仪器设计及创新应用『点击观看』 |
毕研刚 |
清华珠三角研究院 研究员 |
14:00-14:30 |
鱼与熊掌皆可得之—国产高端分子互作分析系统分享『点击观看』 |
陈雍硕 |
极瞳生命科技(苏州)有限公司 市场总监 |
14:30-15:00 |
表面等离子共振技术在药物研究多种领域中的应用 |
曹岩 |
海军军医大学药学系 副教授 |
15:00-15:30 |
分子互作技术联用发现活性天然先导物和靶标研究 |
刘将新 |
中国科学院昆明植物研究所 研究员 |
15:30-16:00 |
靶向互作清除肿瘤起始细胞 |
李珂 |
中国医学科学院医药生物技术研究所 研究员 |
16:00-16:30 |
两种微量热技术在分子互作检测中的应用『点击观看』 |
吴萌 |
中国科学院分子细胞科学卓越创新中心 高级工程师 |
报告期间Q&A合集汇总(仅限文字答疑部分)
Q1:一般设置多少温度用于检测蛋白互作?
樊峥:老型号的仪器无法降温控制,只能设置室温以上温度,新型号的设备可以控温,一般设置为室温,可根据具体实验要求调控温度。
Q2:样品无损失,可回收的话,还可以使用吗?
樊峥:可以的。
Q3:请教表位竞争实验孔板的排布设计,7X7的矩阵为什么H行还要设计不同的抗体?
樊峥:H行抗体可以作为单独抗体结合的对照。
Q4:SA传感器,loading生物素化FcRn,想问一下信号一直掉该怎么优化条件呢?
樊峥:SA传感器信号不稳的常见原因是生物素的问题。
Q5:检测小分子与蛋白之间的互作一般推荐使用哪种传感器?
樊峥:小分子一般建议用SSA传感器。
Q6:请问各位老师:1).不同抗体,分子大小一样,loading高度一致,和同一个抗原的反应的response高度不一致,这个可能是什么因素引起的,亲和力,表位?
2).根据我的一些项目数据,同样的样品,在SPR和BLI检测出来的亲和力数据不太一致,尤其在亲和力比较高的样品里,往往BLI测出来的亲和力会高出一个数量级,这个现象你们有了解不,我该相信哪个数据。
3).我们测亲和力一般是在25度反应,为什么不在生理条件,比如37度去做,这样更真实反映在人体内的结合解离情况?
张财辉:1).抗体的分子构型是一致的吧?不同抗体的活性比例不一样,抗原的结合信号也就会不一样。
2).由于分子互作是样品在特定的条件下的结合活性,因此不同的方法的比较需要在相同的条件下比较,不同方法会有一定差异,但不会特别多大,如果差异很大,可以把两种方法的实验条件和方法发给我们分析一下。
3).一般体外动力学分析的温度设置25或37℃。
Q7:您好,请问在做亲和力动力学精确表征时浓度要选择几个呐,我看您的例子里有很多浓度都不足5个,这样也是可以的吗?
张财辉:动力学实验,一般浓度建议>4个浓度,结果的准确性会更好。
Q8:通过BLI结果怎么判断化合物与蛋白是共价结合还是非供价结合?
张财辉:首先可以从分子的结构进行分析,如果化合物没有可形成共价的基团,则不可能是共价结合。如果是共价结合,在BLI上面会显示不解离,需要结合结构的信息综合评估。
Q9:NI NITA传感器固化那么低,为什么也能做小分子?
张财辉:不同his标签蛋白,与NTA结合的强弱差异很大,如果固化的牢固,且信号足够高,一般建议>4nm,可以使用NTA传感器。
Q10:请问小分子化合物与核酸的互作适合吗?
张财辉:小分子和核酸的互作,一般会合成带biotin的核酸,然后用SA传感器固化生物素标记的核酸,分析与小分子的结合,有很多这个方向的文章发表了。
Q11:一个96孔板最多能够检测多少个单浓度样品?
张财辉:看机型,如果是16/96通道的,可以整块96孔板或384孔板都加样品,如果是2-8通道的机型,需要扣掉2-3列的缓冲液。
Q12:BLI和SPR都能检测动力学行为,请问什么场景选BLI,什么时候用SPR?
张财辉:SPR和BLI都是基于动力学的方式检测,SPR能够测试的样品,BLI都可以进行,由于BLI技术采用无流路的设计,对溶剂不敏感,因此粗样品,含有高浓度有机溶剂的样品,BLI检测效果更好。
Q13:请问在做小分子垂钓后想验证某一种物质的结合亲和力KD值,双扣除实验应该如何确定浓度范围?
王静:小分子浓度梯度范围一般可以从200uM到0.1uM。
Q14:BLI的靶点只能是蛋白吗?可以是细胞或者纳米颗粒吗?
王静:都可以。
Q15:固定到传感器上的Aβ是单体还是寡聚体?
王静:固定的是生物素修饰的单体。
Q16:MST不纯化的话,非特异结合影响不大吗?
王静:MST检测的是荧光标记的蛋白信号,没有荧光标记的蛋白不会被检测到。
Q17:用SPR做小分子单浓度筛选时,您提到的分子量矫正如何去做?
王静:在编辑方法时,把所有小分子的分子量输入进去,在分析数据时,在分析软件里点击分子量校正即可。
Q18:垂钓再生液有什么推荐的吗?Gly会影响打质谱吗
王静:垂钓中药靶点,再生可以用0.5% 三氟乙酸,做质谱时一般还会用超滤管进行超滤
张财辉:一般建议使用下游质谱能够兼容的缓冲液,比如0.5% PFA三氟乙酸等,如果是核酸样品,可以用NaCl,小分子结合弱,可以直接解离到PBST+DMSO缓冲液中。
Q19:请问SPR垂钓小分子容易造成仪器IFC损坏吗?过程中用的洗脱液和再生液可以相对固定是吗?
王静:垂钓小分子,洗脱液可以是5% DMSO PBS-T,或者0.5% 三氟乙酸。
Q20:请问毕老师您的仪器设计有基于目前市场哪个品牌吗?
毕研刚:原理是我们自己提出来的,全部工作都是我们自己开展的。具体原理可以查阅一些我们课题组发表的文章[1] 王大千. SPR 双分差动干涉成像阵列检测生物分子相互作用技术.北京:清华大学,2012
Q21:SPR能做细胞与药物分析时,细胞固化到芯片吗?
毕研刚:细胞是以贴壁的方式在芯片表面生长的,不需要固化。
Q22:固化细胞用什么技术?谢谢毕老师
毕研刚:不是固化,是自然沉降,贴壁的过程。
Q23:谢谢毕老师,还有一个怎么给药?
毕研刚:通过注射方式。
Q24:FIDA技术是怎么获得粘度呢?
张达威:是通过样品加入毛细管到检测器的扩散时间直接获得的。
Q25:溶液不纯也能检测吗?
张达威:可以的,对蛋白标记特定荧光即可。
Q26:不同压力下平衡曲线位移,代表的应该是不同压力下有不同的亲和力表现,如何跟kon koff联系起来?
张达威:可以参考一下FIDA的动力学note,在网站上可以下载到,非常巧妙的方式。
Q27:如果蛋白失活了对数据有什么影响?标记没有影响?
张达威:特定蛋白需要标签,可以提前表达荧光标签如GFP或者HIS标签。也可以标记配体,对混合样品进行梯度滴定。
Q28:请问这款国产SPR(S-CLASS高通量分子相互作用分析系统)能做单循环动力学模式吗?
陈雍硕:SCK模式已经在我们今年的研发计划中,很快就能正式上线。
Q29: ITC实验中,滴定针一直向样品池加入样品,样品池的样品会不断的被排出样品池,是这样吗?
吴萌:不是的,池子的体积以及加入的样品量都是有要求的,池子中的样品是不会被排出的。
问答互动环节1
问答互动环节2
分子互作交流群
(备注姓名+单位+职位)
敬请期待,2025年第三届“分子互作创新技术与前沿应用”网络研讨会,会议内容及报告赞助请联系赵编辑 zhaoyw@instrument.com.cn
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