细胞和基因治疗(CGT)寻求的是从源头上治疗疾病,它不仅在实现个性化治疗方面具有无限的潜力,而且很有可能治愈以往无法治愈的疾病。在过去的十年里,CGT的研究已经被加速,一些包括淋巴瘤、白血病、脊髓性肌肉萎缩症和遗传性视网膜疾病的药物获批上市。尽管如此,CGT疗法本身就很复杂,有很大程度的可变性,为从源头上保障CGT药物的安全性、有效性,贯穿于整个CGT研发和生产过程的质量控制显得尤为重要,因此如何确保和提高质量控制的精准性是CGT药物成功研发和顺利生产的关键。
数字PCR作为一种可精准实现核酸分子绝对定量的技术,不仅可以可靠而精确地确定质粒质量、病毒滴度和载体拷贝数,而且还可以执行可靠的污染监测,例如支原体和宿主细胞DNA残留检测,为CGT相关产品的成功研发和安全生产保驾护航。QIAGEN以QIAcuity dPCR系统为主体的一系列解决方案,除了已推出的QIAcuity CGT dPCR Assay、QIAcuity resDNA Quant Kit,现又推出CGT Viral Vector Lysis Kit病毒载体裂解新品,再次加速促进CGT应用发展。
CGT Viral Vector Lysis Kit
CGT Viral Vector Lysis Kit提供了从腺相关病毒 (AAV) 样品裂解到病毒滴度定量的完整标准化工作流程。它摒弃了费力的纯化步骤,其改进的配方将QIAGEN强大的样品处理和定量能力相结合,特别适用于不同纯度(例如:生产阶段样本、高度纯化的病毒载体样本)及不同血清型AAV样本(例如:AAV1, AAV2、AAV5、AAV6、AAV8和AAV9)的纯化。同时,搭配使用QIAcuity CGT dPCR Assay,可愈加简单地实现AAV病毒滴度的一致、准确、精确、高度可重复的定量。
QIAcuity CGT dPCR Assay,基于QIAcuity dPCR系统而开发,以实现AAV精确定量。
10种常见靶标基因,每种具有3种荧光基团(FAM/HEX/CY5)可供选择
双淬灭探针设计,减少背景信号以获得最佳性能
避免AAV产品批次误差,保证批次间CV<10%
不依赖于标准品,具有更高的数据重复性和准确性
支持单重和多重检测,具有客户定制功能,最多可实现5重dPCR检测
动态范围广,精确度高
AAV2 样本DNA 经连续稀释后利用QIAcuity CGT dPCR FAM Assay 进行检测。DNA 上样量为2.5-15000copies/μl。采用8.5k 纳米微孔板进行检测,相关系数大于0.99。所有Assay 的变异系数均小于4%。
QIAcuity resDNA Quant Kit,基于QIAcuity dPCR系统而开发,适用于3种常见细胞系(CHO、E.coli、HEK293)的宿主细胞DNA残留精确检测。
内含阳性及内参对照,多拷贝靶标分析确保结果不受宿主细胞DNA碎片水平的影响
与qPCR相比具有更高的检测灵敏度(检出限可低至5 fg)
即使在PCR污染物和其他抑制剂存在的情况下,也能提供准确的宿主细胞DNA定量结果
在低上样量的情况下,QIAcuity大肠杆菌ResDNA 定量试剂盒(dPCR)可提供更高的准确度
反应设置参考制造商的实验流程,结果代表重复样本的平均值
* 低于某厂商大肠杆菌定量试剂(qPCR)的动态范围
QIAcuity集成式数字PCR系统,将微反应制备、PCR扩增和数据分析集成到全自动仪器中,整个流程只需一步手工操作,即可在2小时内快速获得实验结果。在提升检测速度和操作简便性的同时,也最大程度减少由于人工操作不当等外界因素引入的实验误差。同时,搭配QIAgility全自动体系构建系统,可实现dPCR反应体系的自动化配置,更大程度上减少人工操作,提高工作效率。此外,配套软件QIAcuity Software Suite,专为满足21CFR Part 11 规定的要求而设计。
在细胞和基因治疗的整个质控流程,QIAGEN可实现CD3、CD28和ICOS等外源目的基因、AAV病毒滴度、残留宿主细胞、总细胞量、支原体和大肠杆菌的检测,所有Assay均经过严格的湿实验验证,确保其检测特异性和灵敏度。同时,更有EndoFree Plasmid Kit,将高效的内毒素去除步骤整合到质粒纯化流程中,得到的DNA高度适用于可重复且结果可靠的转染。
聚焦生物制药,QIAcutiy大有可为,QIAGEN凭借其强大的研发实力,提供完整的、集成式的解决方案,以促进细胞和基因治疗行业的蓬勃发展。
[来源:凯杰企业管理(上海)有限公司]
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