全面解析Tandex LH-20

Tandex LH-20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，zui后出柱。如果使用反相溶剂洗脱，Tandex LH-20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。

Tandex LH-20常选用单一的溶剂系统，应用最多的是极性强弱不同的如下五种：水、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷。根据溶剂极性的不同，样品分别发生正相或反相分配作用。

除水以外，甲醇是多年来一直使用的极性最强的流动相。当甲醇作为流动相时，Tandex LH-20的保留行为：芳香族化合物＞脂环族化合物＞脂肪族化合物。甲醇作为流动相的另一个特点是：对不同芳香族化合物可选择性保留，这取决于苯环上存在的官能团及杂原子性质、数目和位置。苯环上存在的官能团及杂原子减弱了苯环本身的性质。苯环上所带的OH-越多，极性越强，在Tandex LH-20上滞留的时间越长。碱性物质比酸性或中性物质在Tandex LH-20上滞留的时间更长。

如果样品极性大，选用反相溶剂洗脱（甲醇-水），样品用最少体积的甲醇-水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（必须要进行过滤，否则造成Tandex LH-20堵塞后，就必须将葡聚糖凝胶LH-20的柱头部分弃去，造成不必要的浪费）。如果样品极性小，选用正相溶剂洗脱（氯仿-甲醇），样品用最少体积的氯仿-甲醇溶解，过滤后，湿法上样。

● 流速要控制好，流速不可太快，为了快加压，分子筛效果会降低：过慢会导致样品在柱子扩散严重，达不到分离效果。

● 柱子尽可能长，Tandex LH-20柱长的增加将极大地改善分离，所以不要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。

● 馏分一定要接的细，可1/10，或1/20个保留体积接成一馏分。

● 洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保留体积。

● 如果黄酮类化合物粗提物中有鞣质，那么你就要小心了，Tandex LH-20对鞣质几乎是死吸附的。如果不考虑填料，可用Tandex LH-20分鞣质。

● 填料可反复使用，每次用完，可用甲醇将柱子洗干净，然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来。

1. 上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用；

2. 在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于0.15摩尔。碱会使流速变慢；

3. 不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。