全自动Digital Western Blot揭示多小脑回畸形发病新机制

多小脑回畸形

当神经母细胞增殖、分化、迁移或皮质组织在人类大脑发育过程中被中断时，就会发生皮质发育畸形。多小脑回是皮质发育畸形的一种常见形式，表现为存在许多异常小的脑回，产生不规则且融合的皮质表面。临床上，多小脑回导致各种神经系统症状，如癫痫、智力障碍和口运动功能受损。

多小脑回畸形常见发病机制和临床特征

编码α3-subunit的ATP1A3中的显性突变导致ATP1A3相关疾病的特征性功能性脑疾病，其至少具有三种不同的表型：儿童交替性偏瘫（AHC）；快速发作性肌张力障碍帕金森综合征（RDP）和小脑性共济失调、反射消失、弓形足、视神经萎缩和感音神经性耳聋(CAPOS)。同时，ATP1A3的显性突变也会导致各种形式的发育性和癫痫性脑病，例如伴有或不伴有呼吸暂停的早期婴儿癫痫和脑病(EIEE)、伴有小脑共济失调的复发性脑病或发热引起的阵发性无力和脑病。

全自动Digital Western Blot检测技术揭示ATP1A3损害

Na⁺/K⁺ATPase亚基之间相互作用的分子机制

利用全自动Digital Western Blot检测发现，与野生型相比，所有多小脑回相关变体的ATP1A3和成熟β1亚基的表达均降低，表明αβ-异二聚体的结合、折叠或运输受损。免疫共沉淀后，用全自动Digital Western Blot分析ATP1A3和ATP1B1（形成Na⁺/K⁺ATPase β亚基的蛋白之一）的结合。结果表明，多小脑回相关变体既影响了与β1-亚基的结合，也影响了αβ-异二聚体的正确折叠。最后用全自动Digital Western Blot检测了ATP1A3不同变体在细胞质、细胞器和质膜部分中ATP1A3和β1-亚基的相对表达，发现多小脑回相关变体在质膜组分中，ATP1A3和成熟的β1-亚基表达低。表明高尔基体中的两个亚基之间存在关联机制，以及它们随后向膜的异常运输。