益生菌活菌计数方法比较研究

 益生菌活菌计数方法现状

  随着益生菌功能研究的深入，益生菌越来越多地应用于食品和保健食品中，“ 活菌数”是保证其相关产品质量的一个关键指标。提高益生菌活菌计数方法的准确性和稳定性，可以为企业生产过程中对益生菌相关产品质量的控制、提升食品质量安全水平提供技术支撑，同时可以更好地应用于监管部门的专项抽查、风险监控、执法检验等活动中。

  目前较普遍使用的益生菌活菌计数方法是参照国家标准GB 4789.35-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》。

  食品用乳酸菌主要分为两大类:一类是食品加工用乳酸菌;第二类是具有健康功能的活的乳酸菌，又称益生菌。与食品加工用乳酸菌特征指标不同的是，益生菌产品的活菌数通常都很高，可达到100亿至1000亿以上，而冷冻干燥菌粉原料中活菌数甚至可达到1000亿至10000亿，且生产日活菌添加量与保质期内活菌稳定性通常是益生菌产品最关键的质量标准和功效指标，也是衡量益生菌原料与终端产品市场价值最核心与关键的因素。现行国标在实际应用中发现，进行高活菌密度、某些特殊剂型及配方或含有某些新菌种的益生菌产品的活菌计数时，常常出现结果不稳定或检验结果明显低于生产时活菌添加量的情况。

  影响计数结果最主要的影响因素包括稀释液和计数培养基。样品稀释时，三个因素对活菌的准确计数影响最大:稀释比例、稀释液组成和pH值。综述前人的研究经验(2):样品制备的稀释比例为1:5-1:10 ;稀释后样品悬液的pH值最好与最佳生长pH值-致;因益生菌具有氧敏感性,稀释液中应该含有抗氧化剂。日本研究者Masamichi MUTO和Fumiaki ABE等(2010年)在研究了多种稀释液配方后认为，Mitsuoka' s缓冲液适用于含有严格厌氧的双歧杆菌活菌产品的稀释，该缓冲液含有磷酸盐、半胱氨酸和吐温80,前2个成分分别具有缓冲能力、抗氧化能力，而吐温80则可改善产品在稀释液中的分散能力。(3)目前国标方法选用的培养基如下:以MRS琼脂(厌氧)为总乳酸菌计数培养基;在含有多菌种的产品中，以添加有莫匹罗星抗生素的MRS琼脂(厌氧)作为双岐杆菌选择性计数培养基，以MC琼脂(需氧)为嗜热链球菌选择性计数培养基，以总乳酸菌数减去双歧杆菌和嗜热链球菌数为乳杆菌数。但是,近年来,综述多个研究结果(2, 3)，RCM培养基可提高冷冻干燥双歧杆菌的活菌计数准确性。

  此外，本实验室多年来采用GB 4789 .34-2003《食品卫生微生物学检验双岐杆菌检验》中推荐的TPY琼脂培养基用于乳酸菌的计数，发现其用于益生菌产品的活菌计数结果较稳定。

  为此，本研究比较了两种稀释液及几种计数培养基对两类代表性益生菌产品(冷冻干燥活菌粉原料和益生菌颗粒产品)活菌计数结果的影响，以确定更符合益生菌产品特点的活菌计数方法。