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使用 iMScope TRIO 进行的毒性评价研究 - 胺碘酮给药后大鼠肺脏局部分析 -
在药物研发过程中,候选化合物的药代动力学分析不仅能阐明药效药理学机制,从毒性评价的观点出发也能带来重要的信息。一般情况下,会采用放射自显影(Autoradiography: ARG)和荧光染料的方法,但 ARG 的费用十分昂贵,若将荧光剂作为标记试剂使用又可能会对药代动力学造成影响。于是,近年来,作为非标记检测候选化合物局部信息的方法,MS 成像的分析技术备受瞩目。本方法不仅能在不进行标记的情况下进行各种物质的成像分析,还能在同一切片上同时进行原药和代谢物的检测,为新药研发带来突破。
图 1 胺碘酮的结构式
图2 成像质谱显微镜 iMScope TRIO
在此,为比较胺碘酮(图 1)给药后,大鼠肺组织中观察到的病理现象和胺碘酮的分布情况,使用成像质谱显微镜 iMScope TRIO(图 2)进行 MS 成像分析。
S. Iwasaki
胺碘酮给药后的大鼠肺脏局部分析
本实验中,对大鼠给予抗心律失常药物胺碘酮并对其肺组织进行分析。大量摄取胺碘酮后会引发磷脂质病,能观察到细胞的泡沫状巨噬细胞浸润等现象。但至今为止并没有关于胺碘酮是否会在病变部位蓄积的信息,因此在本实验中采用 MS 成像的方法确认了病理现象与胺碘酮之间的关系。使用胺碘酮标准品进行预实验,选择基质并对测量模式进行优化。样本制作及组织切片 MS 成像分析的实验条件如表 1 所示。
使用成像质谱显微镜 iMScope TRIO,进行空间分辨率为 5 μm 的高分辨率成像,将所得组织切片上的质谱图与标准品的质谱图进行比较后,发现两者均检测得到 m/z 646.0 的信号(图3)。选择 m/z 646.0 成像,确认在细胞的泡沫状巨噬细胞浸润的部位有胺碘酮积蓄(图 4)。
图 3 组织切片和胺碘酮标准品的质谱图
图 4 连续切片的 HE 染色图像和分析使用的光学图像和 MS 成像
胺碘酮代谢产物的局部分析
图 5 组织切片的质谱图(m/z 600-700 放大)
图 6 MS 图像(与代谢物的分子量相当)
有报告指出,给药后,胺碘酮会在大鼠体内发生 N- 脱乙基代谢。本实验观测到与胺碘酮原型药物相比小 28 Da 的 m/z 618.0 离子(图 5)。m/z 618.0 的 MS 图像如图 6 所示,与胺碘酮的局部分布相同。据此,可认为 m/z 618.0 的化合物有很大可能是胺碘酮的 N- 脱乙基化代谢物。
MS图像与HE染色图像完全一致的可能性
图 7 MS 成像分析后组织切片 HE 染色流程
由于无法对 HE 染色后的切片进行 MS 成像分析,需要对与 HE 染色切片连续的未染色切片进行 MS 成像分析。但是,即使是连续切片,组织形态相似也不等于完全一致,有必要依靠特征性的标记进行定位。如今,为解决该问题,按照如图 7 所示的流程,用有机溶剂从经 MS 成像分析的切片中除去基质,然后进行 HE 染色,由此研究确保了相同切片的 HE 染色图像与 MS 图像的位置信息完全一致。
致谢
在获取本应用文集相关数据以及原稿编写过程中,田边三菱制药株式会社药代动力学研究所的锻治秀文老师、以及桥本博幸老师给予了我们莫大帮助,在此我们致以最诚挚的谢意。
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