使用液相色谱法一次测定多种水溶性维生素

       维生素是人体重要的营养物质，但有些维生素在人体内无法合成，或合成量不能满足机体需要，要从外界摄取以满足人体需要。维生素根据溶解度的不同，分为水溶性和脂溶性两类，水溶性维生素主要有维生素C、B1、B2、B3、B5、B6、B11和B12。不同水溶性维生素的结构差异较大，化学性质不稳定，分离检测较为复杂困难。

       目前水溶性维生素的测定方法主要有分光光度法、分子荧光法和高效液相色谱法等。分光光度法的样品前处理较复杂，且干扰物多，测定结果偏高。分子荧光法的样品前处理也复杂，定量不精确。高效液相色谱法的样品前处理简单，用量少，可一次分析多种水溶性维生素，是目前最合适的测定方法。

实验部分

      采用离子对试剂（四丁铵）作为流动相，由于离子对试剂易吸附在色谱柱上不易彻底清除，因此建议用来分析水溶性维生素的色谱柱专用。

图1. 9种水溶性维生素标准品的色谱图（上）和等高线图（下）

1. 维生素 B1 (硫胺素) *    2. 维生素 B6 (吡哆素) *  3. 烟酰胺  

4. 维生素 B12 (氰钴胺素)   5. 抗坏血酸糖苷  6. 维生素 C (抗坏血酸)  

7. 异抗坏血酸   8. 维生素 B2 (核黄素)   9. 菸碱酸

       使用二极管阵列检测器（简称：DAD），除了色谱图外，还可获得光谱图，两者结合可排除仅通过色谱保留时间定性造成的假阳性峰，能对食品和其他含有大量杂质的样品进行精确有效的分析。

                                                        图2. 维生素B6的标准曲线

      9种水溶性维生素的标准曲线(浓度范围0.1 ~ 50 mg/L)均显示了良好的线性， r² 均≥ 0.996。但采用流动相进行稀释时，维生素C、异抗坏血酸和维生素B₁₂ 不稳定，为获得良好的线性，需使用新配制的溶液进行测定。

                                                 图3. 保健饮料的测定结果

            图4. 营养补充剂的测定结果

       该方法可同时检测多种水溶性维生素，标准曲线线性良好。借助二极管阵列检测器，可对食品和其他含有大量杂质的样品进行精确有效的分析，排除假阳性性峰的干扰。由于维生素C和异抗坏血酸不稳定，在样品制备过程中或随着时间的推移，二者容易发生分解，因此难以获得良好的线性和重现性。所以，此方法适用于定量分析，在定量分析时，建议对各维生素单独测定。

关于日立高效液相色谱仪，请见链接：

https://www.instrument.com.cn/netshow/SH102446/Product-C0102-0-0-1.htm

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