细胞生长曲线测定,这些问题你遇到过么?
下图是一个典型的细胞生长曲线图
细胞增殖的研究方法有很多,主要包括:BrdU,EdU,CCK8,MTT等方法。其中测定细胞生长曲线是检测细胞绝对生长数的常用方法,也是判定细胞活力的重要指标,是细胞生物学特性的基本参数之一。因为细胞太小,无法测单个细胞的生长状态,所以测细胞群体的生长曲线。
在做细胞生长曲线测定过程中,我们经常遇到以下几个问题:
1、如何选择细胞接种数?
答:可根据细胞传代培养过程中接种数及细胞生长周期进行计算,细胞接种数因细胞的不同而不同。
2、细胞生长曲线测定时为什么要做重复孔?
答:测定细胞生长曲线细胞计数时选择 3 个复孔,每孔分别计三次,取其平均值,目的是减小操作误差。
3、细胞生长曲线测定周期是几天?
答:一般是一个星期。
4、为什么绘制的细胞生长曲线没有达到平台期?
答:可能有以下原因:一是细胞接种密度过低;二是细胞培养时间过短;三是细胞生长状态不好,使其不能正常增殖。
5、为什么细胞计数第一天,细胞数没有增加反而减少?
答:一般细胞传代后,会有一个生长缓慢的潜伏期,细胞不增殖,而细胞会有正常的死亡,故细胞数不增加反而减少。
6、细胞生长曲线还有其他方法绘制吗?
答:当然有。我们提到最多的是直接计数的方法,除此以外还有相对计数的方法,该类方法首先要绘制标准曲线,标定细胞数和某个变量的函数关系,然后我们只需要测定每天这个变量的值便可以计算出细胞数。常用的是 MTT、CCK8 等比色的方法
实验室细胞培养
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[来源:北京桑翌实验仪器研究所]
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