【干货分享】昊诺斯第九期“组织研磨和样品处理分享、讨论”

【干货分享】昊诺斯第九期“组织研磨和样品处理分享、讨论”

这一期我们为大家提供的案例是“石榴皮研磨提取RNA”：

实验：石榴皮研磨提取RNA

实验地点：武汉某生物公司

试验样品：石榴皮样品

1、将石榴皮剪成小碎块冻存，实验时取出放入圆底离心管，单管放入体积不超过离心管体积的1/3；

2、在离心管中加入硬质不锈钢研磨珠，盖好管盖，与适配器一起放入液氮然后取出；

3、将取出后的适配器安装在TL2010S中通量组织研磨仪上，参数设置为一定转速，研磨一定时间。

在昊诺斯销售工程师对以上案例简单讲解之后，用户们在“昊诺斯鼎昊源组织研磨分享”群内进行了热烈的分享、讨论：

用户：石榴皮含有果胶吧？

 昊诺斯：应该含有少量果胶，其实石榴皮也算是植物样品中的一类。

用户：果胶纤维素的存在对检测过程有影响吗？

  昊诺斯：研磨的方法与研磨叶片相同。

用户：我看看。

  昊诺斯：应该不会有影响，现在的RNA提取试剂还是挺成熟的。

用户：时间不一样吧。

  昊诺斯：您是说研磨时间？

用户：嗯，知道了，还有提取试剂存在。

  昊诺斯：石榴皮冻过液氮以后还是很好研磨的。

用户：前面的负八十有必要吗？后面直接液氮了？

  昊诺斯：前面的-80是保存样品。

用户：前面的负八十有必要吗？后面直接液氮了？我也有同样的疑问。

用户：负八十是为了降低空气体积吧，免得液氮时爆开。

  昊诺斯：这个使用的客户也是服务公司，样品都是别的客户提供的。

  昊诺斯：也有这方面的原因。

用户：液氮的温度是多少度？

用户：我想问管和钢珠需要depc水处理吗？

  昊诺斯：负一百九十多。

用户：这个是必须的吧，196。

  昊诺斯：如果提取的是RNA，是必须处理的。

用户：那我想问问有没有替代离心管的适配器？我一用就裂管。

用户：换管子材料吧，能禁得起冷冻的。

用户：你们用哪一种牌子的？

  昊诺斯：我们的经验是选用圆底2ml离心管，减少液氮冷冻时间，缩短组织研磨仪研磨时间，或者换个牌子的离心管。

用户：我都试过了，就在组织研磨仪研磨后发现裂了，所以想问问你们用什么牌子。

  昊诺斯：哪位老师用的管效果还可以，可以介绍一下。

用户：我们用的一直都不错，也出现过裂管。

  昊诺斯：据用户说这款的不错。

昊诺斯：还有eppendorf的。

用户：进口的？无须灭酶了？

用户：然后就调低组织研磨仪转速1000吧，延长打样时间。

  昊诺斯：进口的，第一个是Thermo的。

用户：其实我个人觉得RNA也没有想象的那么恐怖。

用户：哦哦，谢啦。

用户：三无的管子。

用户：裂管是因为温差变化太大么？

用户：就是不清楚。

用户：有个疑问啊，DNA和RNA能实现分离吗？

用户：钢珠用酒精泡泡，提的RNA就OK。

用户：组织研磨仪能否控温？

  昊诺斯：现在好像有种提取液可以实现。

用户：管子裂是因为液氮下塑料变得脆了，然后高速钢珠一冲撞就裂了。

用户：为什么要分离呢？样品很珍贵？

用户：您的意思是先提取DNA，然后继续利用提取完的原材料来提取RNA？

用户：塑料材质达不到低温保护。

用户：提完分别用对应的酶处理这样技能保证量也能保证质。

用户：不是，我的意思是两者有没有分离干扰？

用户：用trizol说明书上说是可以DNA和RNA分离。

  昊诺斯：应该是没有，之前我问过一个客户，用组织研磨仪研磨一次，用特定的提取液，可以同时提取DNA和RNA。

用户：同一样品可以同时提取。

用户：提 RNA不如DNa省事。

用户：我们打样裂过后采取的措施第一减低组织研磨仪转速，打样后然后再冻再打，延长打样时间；二把样品分装两管打样后加上TRIZON再合并。

用户：嗯，看来提取剂的选择性已经非常高了。

  昊诺斯：您可以先降低下组织研磨仪研磨速度，比如1900转或者1800转，试下。

用户：我用的是1700。

用户：速度关系不大，是温度导致的。

用户：那如何是好？

用户：只能换管子材料。

  昊诺斯：嗯嗯，就像吕老师说的，可以研磨比如30s，取出后再冻液氮，然后再磨，少量多次。

用户：国外进口的不知道现在怎样，之前也碎过好几个，把老板心疼坏了。

  昊诺斯：进口的应该效果会好一点，毕竟国内的良莠不齐。

用户：当时还不是研磨，只是离心。

用户：有个疑问：离心管有金属材料的么？

用户：感觉应该有，但没见过。

  昊诺斯：我们有5ml不锈钢的研磨管。

用户：容积大的我们也有，但是1.5的没见过。

用户：304材质的可以，耐低温和高温。

用户：不锈钢的成本太高吧，会不会引进交叉污染？

用户：但是不锈钢的可以重复使用呀，灭菌即可。

  昊诺斯：清洗消毒干净，应该不会交叉污染。

用户：304的很耐操的。

昊诺斯：304很耐腐蚀。

  昊诺斯：盖是什么材质的？

用户：标配是聚乙烯，可选配硅橡胶。

用户：应该挺成熟了。

用户：现在可以适配上这个机器吗？

  昊诺斯：看介绍和2ml离心管的尺寸一样，应该可以。

访问http://www.herosbio.com/pro.asp?thebigclassid=14&bpro_id=93可以了解先关产品信息！

扫码关注昊诺斯微信公众号