多重PCR技术检测一次性使用纸质卫生品更快更准

　　11月19日，天津检验检疫局工业产品安全技术中心主持的国家质检总局科研项目“一次性使用纸质卫生品安全卫生项目快速检测技术的研究”通过专家组验收，该项目针对当前一次性使用纸质卫生品前处理过程冗长、操作不方便的现状，采用多重荧光PCR技术，解决了以往检测时间长、通关速率低等问题，为该类型产品大批量检测提供了技术支持。

　　传统方法亟须改进

　　一次性使用纸质卫生品是与使用者皮肤直接接触产品，其卫生安全性能尤其重要，如果生产工厂在原料控制、环境消毒、清洁制度、生产过程等方面管理不善，都可能孳生对人身体有害的微生物。

　　对进出口一次性使用纸质卫生品进行微生物项目检测是国内外标准最重要的安全卫生项目要求，我国国家标准规定了一次性使用纸质卫生品要进行微生物检测，包括初始污染菌、细菌菌落总数、大肠菌群致病性化脓菌、真菌菌落总数的检测，国外大多数国家标准对一次性使用纸质卫生品安全卫生也有类似的要求。

　　目前国内外进行一次性使用纸质卫生品微生物检测一般采用细菌培养方法。其优点是方法可靠成熟，但目的微生物都需要分别进行培养及检测，每次检测需要至少7天时间才能完成，导致检测时间长，远不能适应进出口检验工作需要。

　　近年来，我国各口岸进口一次性使用纸质卫生品数量呈增长趋势。据统计，2012年天津口岸全年进口357批，货值1500万美元，2013年上半年进口达214批，货值1200万美元。进口量的不断增加给检验检疫部门提出了更高的要求。

　　为进一步提高针对一次性使用纸质卫生品的检验监管水平，保证产品质量，保障消费者身体健康安全，天津检验检疫局落实“检得快、检得出、检得准”要求，在现在检测方法的基础上开展科研攻关，旨在建立一套快速高效、高通量的检测方法，为检验检疫执法提供技术保障。

　　天津检验检疫局纸张纸浆检测重点实验室是第一批国家级重点实验室。近几年来，实验室先后引进了荧光PCR等高端检测设备，技术实力大幅提高。针对国外一次性使用纸质卫生品大量进口国内的现状，实验室科研人员先后走访上海、广东、山东等口岸，在深入调研、了解需求的基础上，于2011年向国家质检总局提出“一次性使用纸质卫生品安全卫生项目快速检测技术的研究”课题，并于2012年经批准立项。

　　科研创新破解难题

　　易感染致病菌是影响一次性使用纸质卫生品安全的主要因素之一。根据现行国家卫生用品安全监管体系，沙门氏菌(Salmonella spp)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，大肠杆菌(E.coli)和白色念珠菌(Candida albicans)均属重点关注的卫生用品致病菌。用传统方法检测这类致病菌，程序较繁琐，准确度不高，在检测速度、敏感性与特异性等方面也有局限性。

　　用细胞生物学和分子生物学方法代替动物实验和菌类培养，是目前国内外检测科研技术的研究方向。天津检验检疫局工业产品安全技术中心实验室人员开展以分子生物学方法为基础的一次性使用纸质卫生品毒理学和微生物快速检测技术研究，经过反复比较，课题组最终确定选用多重PCR技术，在同一反应体系中同时加入多对引物扩增多条目的DNA片段，实现多种病原微生物的同时检测，为病原微生物的鉴定提供了快速、灵敏、经济的方法。

　　课题组参照文献中沙门氏菌的invA基因、绿脓杆菌的ETA基因、金黄色葡萄球菌的nuc基因，大肠杆菌的phoA基因和白色念珠菌5SrRNA区特异的非转录区为靶基因，选取这5个基因序列所设计的引物，对上述菌株进行PCR检测。对选取的目的菌株进行单重及多重PCR扩增，结果目的菌株均能显示出特异条带，说明本反应体系稳定，引物特异性良好。

　　课题组采用单管多重PCR体系，通过二重PCR随机组合、三重PCR随机组合方法对实验菌株进行检测，均得到了较为满意的检测灵敏度。

　　科技成果实用有效

　　课题建立的多重PCR方法可完成对多种病原微生物的检测，有较好的特异性和敏感性，并实现了高通量检测，为卫生用品中致病菌的快速筛查提供了一种重要技术手段。比传统的细菌学方法简便经济，采用该方法目前可以在两天之内完成样品的检测，大大提高了检测速度。该方法目前已在天津市纸质用品生产企业得到应用，并拟在全国各大口岸进行推广。

　　项目还设计了一套一次性使用纸质卫生品的前处理装置。该装置针对目前纸质卫生品处理过程通过人工完成，存在自动化程度低、样品反应效率低、人工取样精度低等问题，研发了一套全自动的纸质卫生品前处理装置，该装置可以将整块纸质卫生品裁切成块状的结构，便于做进一步检测，提高了纸质卫生品与试剂之间的反应效率，满足大规模的处理需求。同时采用了电子称重计和试剂计量模块，具有计量精度高、处理结果可靠度高的优点。目前，该装置已获得国家知识产权局两项实用新型专利授权。