荧光RT-PCR技术检测H7N9禽流感病毒法问世

　　4月17日，在北京检验检疫局承担的国家质检总局科技计划项目“禽流感病毒H7N9亚型双重荧光RT-PCR定型技术研究”鉴定会上，专家组一致认为：该项目创新性地实现了对禽流感病毒H7N9亚型的一步快速定型，可在一次检测中确认样品中是否存在H7N9亚型禽流感病毒或其他H7亚型和N9亚型的禽流感病毒;在通用性、特异性、灵敏性上，技术优势突出。专家组同意项目成果通过鉴定，并建议在进一步扩大和完善动物临床验证实验基础上，尽快推广应用。

　　目前，在国内通用的确诊禽类中禽流感病毒H7N9亚型的检测技术中，除采用传统的鸡胚病毒分离方法外，通常采用核酸检测方法，如普通PCR方法和基于荧光RT-PCR的“二步法”，但还没有建立起采用荧光RT-PCR技术“一步法”检测禽流感病毒H7N9亚型的方法。

　　据该项目组负责人、北京局检验检疫技术中心动物实验室博士高志强介绍，项目在实验过程中，共建立了3种检测方法。最终的禽流感病毒H7N9亚型双重荧光RT-PCR检测方法是在禽流感病毒H7亚型和N9亚型单重荧光RT-PCR检测方法的基础上通过优化建立，从而实现了对禽流感病毒H7N9亚型的一步快速定型。这种方法不仅能检测最近流行的H7N9毒株，还可以用于筛查其他H7亚型毒株。此方法不仅引物特异，而且探针特异，这一“双特异”性保证了结果的准确性，同时比普通PCR检测技术要灵敏100~1000倍。

　　高志强还指出，本项目在实施过程中，制备了H7N9病毒的HA和NA基因全长的外标物质，具有均匀和稳定的特点，可在检测过程中对逆转录和PCR扩增这两个重要环节进行控制，对规范诊断检测试剂和实验室质量控制具有重要意义，使不同试剂的检测结果具有了可比性，可用于消除不同人员操作间的差异，解决了目前H7N9检测缺乏质量控制外标物质的现状。

　　鉴定会上，由来自中国农业大学、中国医学科学院、中国科学院、中国农业科学院等单位的7名专家组成的鉴定委员会审查了项目组提交的相关资料，听取了项目组的汇报，审阅了相关鉴定资料，最终同意项目成果通过鉴定。

　　北京局自2001年开始开展荧光RT-PCR检测技术研究，是国内首家将荧光PCR技术应用到检验检疫领域和动物疫病防控领域的单位，并在实践中不断发展完善荧光RT-PCR检测技术，先后建立了禽流感病毒、新城疫病毒、口蹄疫病毒等多项荧光RT-PCR检测技术，获得国内首个动物疫病荧光PCR检测新药证书。

　　据悉，自3月31日国家卫生和计划生育委员会通报上海和安徽发现3例人感染H7N9禽流感病例后，在国家质检总局有关领导的指导下，该局第一时间成立了禽流感检测技术研究应急专项小组。北京局局长齐京安号召：“疫情就是命令，我们要迅速行动、全力以赴，为保障人民群众身体健康作出检验检疫部门的贡献。”一声令下，科技人员纷纷行动起来：及时收集、查阅最新流感资料;第一时间获得此次H7N9亚型禽流感病毒的安徽株和上海株的基因序列;结合实验室多年整理保存的禽流感研究资料，重点针对HA基因和NA基因进行序列分析比对……经过一系列努力，最终找到了变异位点，确定了双重荧光RT-PCR检测技术研究方案。

　　北京局副局长李忠榜表示，该项目为禽流感病毒H7N9亚型的检测提供了快速、高效方法，能够检测到样品中微量禽流感病毒。该课题鉴定后，课题组还将做大量的验证工作，在实践的检验过程中不断完善并制定禽流感病毒H7N9亚型检测国家标准，以便将该技术尽早应用到防控工作中，为确保活禽和禽产品的进出口安全，为国内养殖企业禽流感疫情普查，为老百姓吃上放心禽产品提供服务。同时，该局会尽快将研究成果应用到检验检疫工作中，接受实践检验，为提高口岸一线的检测能力做好技术储备和技术支持工作。