睿科推出针对β2-受体激动剂检测的整体解决方案

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分享： 2011/06/17 11:08:10

β2-受体激动剂是指含氮激素中的苯乙胺类药物（phenethylamines,PEAs）苯乙胺类药物具有苯乙醇胺结构母核，苯环上连接有碱性的β-羟胺侧链。盐酸克伦特罗为国家按兴奋剂管制的β2-受体激动剂，目前，β2-受体激动剂已有20多种，我国禁止所有β2-受体激动剂用于养殖业。近年来，非法使用盐酸克伦特罗（非法用于养殖时俗称“瘦肉精”）饲养生猪事件屡禁不绝，严重危害食品安全和人民群众身体健康。一些不法养殖户转向购买人用盐酸克伦特罗或其他β2-受体激动剂直接饲喂生猪。本文在已有的方法基础上改进了仪器方法，睿科仪器新推出的全自动固相萃取系统,与串联四极杆液质联用系统可以同时测定九种β2-受体激动剂。实验证明该方法快速、简单，灵敏度高，完全达到了国内，欧盟和日本的要求。

试剂

标准品化合物的结构见图1。乙腈购买于Fisher公司，甲酸购买于Merck公司，甲酸铵购买于Acros Organics公司，水为Milli Q。

图1. 被测β2-受体激动剂的结构

试样制备与保存

牛、猪肌肉组织：若为冷冻样品，将其放置室温下化冻。从原始样品中取出部分有代表性样品约100g，经组织搅拌机将样品均匀搅碎，用四分法缩分出适量试样，均分成两份，装入无菌采样袋中，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样（-18℃保存），试样再利用匀质机10000r/min转速下将样品制备均匀。

样品前处理

样品制备

提取

1）称取制备好的样品2.00（±0.02）g，置于50mL离心管中，加入8mL乙酸钠缓冲液，再加入50μLβ-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶，匀质机匀质30s(10000 r/min)，37℃水浴酶解12h。

2）取出后放置室温，加入100μL β-激动剂内标工作溶液(8.7)，100μL β-激动剂加标溶液，加盖后涡旋振荡，离心10min（5000 r/min），取4mL上清液加入0.1mol/L高氯酸溶液5mL，混合均匀，用高氯酸调节pH值至1±0.3。离心10min（5000 r/min），将全部上清液转移至另一50mL离心管中，用10mol/L氢氧化钠调节pH值至11。

3）加入10mL氯化钠饱和溶液和10mL异丙醇-乙酸乙酯（6+4）混合溶液，加盖至于水平振动器振荡10min。在5000 r/min下离心10min。转移全部的有机相，在40℃水浴下氮气将其吹干。

4）加入5mL pH=5.2的乙酸钠缓冲溶液，涡旋振荡10s后，进行SPE净化

净化

1）将固相萃取小柱置于固相萃取装置Fotector上，次用5mL 甲醇、3mL水活化小柱；

2）将上述待净化的溶液加入萃取小柱，弃取流出液，然后依次用3mL去离子水，3mL 2%甲酸水溶液(v/v)，3mL甲醇淋洗小柱，弃取流出液，并采用负压抽干小柱；

3）10mL 5%氨水氨化的甲醇溶液洗脱目标物，此时收集洗脱液；系统自动浓缩定容；

4）往管中加入1mL含0.1%甲酸的5%甲醇溶液复溶样品，涡旋震荡后，滤液待测。

分析条件

样品采用串联四极杆液质联用仪进行分析。

液相条件

采用液相色谱仪，配置有脱气机，二元泵，自动进样器。色谱柱： SB-C18, 2.1×100, 1.8μm。流动相组成：A为10mM Ammonium Formate +0.1% Formic Acid水溶液（用乙酸调节pH值4.5），B为乙腈溶剂。流速0.3mL/min，柱温40℃。梯度洗脱。

质谱条件

串联四极杆质谱仪。在（+）ESI模式下，采集数据，设定质谱参数如下：Capillary 4000V，Drying Gas 11L/min，Neb Press 35 psi，Gas Temp 350℃，碰撞气为高纯氮气，Q1和Q3的分辨率均为单位质量分辨。MRM模式下的参数如下：

保留时间	化合物	母离子	子离子	驻留时间 (ms)	碰撞电压 (V)	碰撞能量 Energy (V)
4.95	特布它林	226	152	10	100	15
4.95	特布它林	226	170	10	100	30
4.98	齐帕特罗	262	244	10	100	10
4.98	齐帕特罗	262	185	10	100	25
4.98	沙丁胺醇	240	222	10	100	5
4.98	沙丁胺醇	240	148	10	100	15
5.04	塞曼特罗	220	202	10	80	5
5.04	塞曼特罗	220	160	10	80	15
5.80	莱克多巴胺	302	284	10	100	10
5.80	莱克多巴胺	302	164	10	100	15
6.15	妥布特罗	228	119	10	100	30
6.15	妥布特罗	228	172	10	100	10
6.18	克伦特罗（瘦肉精）	277	203	10	100	10
6.18	克伦特罗（瘦肉精）	277	259	10	100	5
6.37	溴布特罗	367	349	10	100	10
6.37	溴布特罗	367	293	10	100	15
6.49	克仑潘特	291	203	10	100	15
6.49	克仑潘特	291	273	10	100	5
6.52	马布特罗	311	237	10	100	15
6.52	马布特罗	311	293	10	100	10
6.83	马喷特罗	325	237	10	100	15
6.83	马喷特罗	325	217	10	100	25