贝克曼库尔特公司与国家CDC合作开发甲型H1N1流感病毒快速检测方案

　　世界卫生组织已将甲型H1N1流感警告级别提到5级，强烈显示即将发生的大流行。据世卫组织公布，截止于2009年5月13日11点，全球确认甲型H1N1流感5,969例并蔓延28个国家，给各国在紧急预警和疫情控制方面提出了严峻的挑战。继香港首例甲型H1N1确诊后，5月11日，四川一例甲型H1N1流感疑似病例被确诊，5月12日17时，山东报告1例甲型H1N1型流感疑似病例，当日香港发现一名甲型H1N1流感疑似个案。由于病毒引起的感染症状多比较相似，采用常规方法很难确认感染类型，因此对于甲型H1N1流感的早期快速确诊对于有效控制疫情至关重要。

　　美国贝克曼库尔特公司在病毒核酸提取，实验室自动化和病毒核酸检测领域有着丰富的经验和完整的解决方案。针对本次甲型H1N1流感疫情，公司已与国家CDC开展合作，根据世界卫生组织最新发布的H1N1流感病毒序列信息和双方技术基础联合开发甲型H1N1型流感病毒快速诊断方案，并同时开发包括人流感，禽流感，猪流感，SARS等多种上呼吸道病毒检测和变异分析标准方案，该方案具有快速、准确、安全、低成本等特点，并可用于流感病毒快速筛查、病毒分型、突变检测和流行病学研究。

　　• 病毒核酸安全提取

　　美国贝克曼库尔特公司的SPRI-TETM Viral NA提取试剂盒结合SPRI-TETM自动核酸提取仪，为甲型H1N1流感病毒核酸的提取提供了快速安全的解决方案。SPRI-TETM采用固相载体可逆式磁珠对病毒RNA进行高效抽提，从样品的裂解到核酸的洗脱都无需人工干预，将操作者危险性降到最低。SPRI-TETM系统可以一批次提取1-10个样品，每批次提取时间约30分钟。

　　• 特异性引物设计

　　根据WHO已公布甲型H1N1流感序列，美国贝克曼库尔特公司与国家CDC合作设计出高特异性PCR扩增引物组。该引物组采用GeXP系统的 eXpress ProfilerTM模块设计，包括5对特异性引物，分别为A型流感，H1N1型流感，季节性流感，甲型H1N1流感和质控序列。与常规PCR引物不同，每对引物5’端均带有通用引物，5组扩增产物长度范围在100- 600碱基。

　　• 甲型H1N1病毒快速检测

　　利用贝克曼公司专利的XP-PCR技术，对5对引物(5对流感病毒特异引物和一对内质控引物)进行多重扩增( 整个流程由BiomekTM系列自动化工作站完成)。多重PCR产物因长度不同，可经过毛细管电泳分离检测。电泳原始数据、样本信息和基因信息输入GeXP软件系统进行分析， 即可得到样本的病毒检测报告。

　　• 病毒分型和变异检测

　　在多重病毒监测基础上，利用标准甲型H1N1病毒引物扩增病毒基因组序列，利用GeXP系统的序列分析功能分析病毒变异位点和可能的蛋白质序列变异。

　　该方法可以将常见流感症状的可能病原体一次性扫描，确定检测样本的感染类型，具有样本需求低，检测速度块，同时可以监测病毒的变异状况。