苏丹红检测方法国家标准呈两大特点 检测成本低 适用范围广

3月29日，国家质检总局和国家标准委联合发布了有关苏丹红检测方法国家标准———《食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法》（GB/T 19681-2005）。该标准已于发布之日起实施。
    这项标准适用于食品调味料和食品成品中苏丹红的检测，克服了单纯采用欧盟标准的不足，如定量不够精确且不适于食品成品中苏丹红的检测。相对于欧盟标准所要求的仪器、试剂等方面较高的成本而言，这项标准要求的仪器、试剂等方面的成本较低，我国绝大部分县级技术机构都可以根据这项标准实施检测。

适用于大部分技术机构

    苏丹红在我国的食品中被发现时，我国检测苏丹红的一个主要依据是欧盟标准。使用欧盟标准所要求的液质联用仪对食品中的苏丹红进行检测，必须对复杂的色谱结果进行质谱确证，一台液质联用仪的价值高达300多万元，使用该仪器对消耗的试剂的纯度及操作的人员的水平都有极高的要求。在我国的使用受到限制，我国目前绝大多数质检机构都不具备液质联用仪，少数有仪器的机构受人员、试剂等限制也不能很好利用。
按照我国发布并实施的苏丹红检测方法国家标准，各地技术机构需要配置或购置的试剂与标准品有丙酮、正己烷、无水硫酸钠、层析用氧化铝（中性）、层析柱管、乙腈、乙醚、无水甲酸及苏丹红I～IV标准物质、标准储备液；需要配置的仪器设备包括高效液相色谱仪、分析天平、梯度泵、旋转蒸发仪、紫外检测器、C18色谱柱（4.6x150cm）、匀桨器、离心机等。其中，高效液相色谱仪的市场价格约4万元，这种仪器在市级以上的技术机构中已普遍配置，发达地区的县级技术机构一般也配置了高效液相色谱仪。除此以外，其他的仪器和试剂都是非常普遍的。需要注意的是，由于不同厂家和同一厂家不同批号的氧化铝产品在活性性能上有很大的不同，很难将其统一精确地控制在一个活度上。标准制定过程中，技术人员将氧化铝在105℃的条件下进行两个小时的活化处理，冷却后加入适量的蒸馏水灭活，用20ml的丙酮配2%浓度正己烷洗脱，用肉眼观察洗脱液的颜色和柱上残留的颜色就可以评价是否可以使用。
    苏丹红检测方法国家标准采用了简单的正相吸附固相萃取原理，一次性去除了样品中红辣椒和番茄中的干扰成分，使用目前国内已普及应用的高效液相色谱仪就可准确完成4种苏丹红染料的检测。制定这项标准时确定了科学的方法流程，这一流程也是实际检测时应遵循的检测流程，即样品制备－称样－分散－提取－离心－分出上清－蒸干－正己烷溶解－固相萃取－洗脱－定容－上机。据介绍，这种检测易于操作，只要配备了相应的仪器，关键是高效液相色谱仪，我国县级以上技术结构的检测人员均可以依据标准对食品中的苏丹红含量进行有效的检测。
    据大连市产品质量监督检验所有关人士介绍，标准实施后，有一些县级技术机构在检测遇到问题时向该所的技术人员咨询，很多问题在电话中几句话就说明白了。

适用于食品成品的检测

    欧盟标准方法即《辣椒粉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红和胭脂树橙的含量分析》中使用的检测仪器是大型液质联用仪。利用欧盟标准和液质联用仪对苏丹红进行检测，由于受提取和纯化的限制，样品中的苏丹红提取率很低，其中，对油性样品中苏丹红的提取率约为60～70%。液质联用的方法对苏丹红的检出限量较高，即必须在苏丹红的含量达到相对较高的水平时才可以检出。这种方法对食品调味料中苏丹红的检测效果很好，但不适合食品成品中苏丹红的检测。
    食品中的苏丹红一般都来自食品调味料。我国虽然有一些初具规模的食品调味料生产企业，但是，食品生产企业自己制备的和不规范的小企业甚至手工作坊生产的食品调味料还占有相当大的比例。仅仅就食品调味料的生产进行监管是远远不够的，必须为食品中苏丹红的检测提出检测方法标准依据。适用于我国国情的检测方法，不仅要包括食品调味料，还要包括食品成品。
    已实施的苏丹红检测方法国家标准采用了简单的正相吸附固相萃取原理，可以一次性去除样品中红辣椒和番茄中的干扰成分；经过严格筛选的提取溶剂，可以将目标化合物从被分析的样品中不丢失的完全提取出来；在欠缺质谱定性检测条件下，通过氧化铝的强吸附作用，可将苏丹红从其他的基质成分中纯化、富集出来；高效液相色谱仪可以准确完成4种苏丹红染料的检测。这些特点表明，我国的苏丹红检测方法国家标准既适用于食品调味品，也适用于含苏丹红残留量的食品成品。

高效液相色谱法的特点

    据标准主要起草人、大连市产品质量监督检验所高级检验师潘炜介绍，高效液相色谱法具有如下特点：
    适用范围宽。由于本方法具有高提取率、高纯化性能、高浓缩倍数，既可以用于检测含苏丹红量相对较多的食品，也可以检测含苏丹红量极少的食品。无论何种基质的样品，都可以应用本标准对食品中的苏丹红进行检测，其中包括干基样品（如辣椒面）、水基样品（如番茄沙司）、油基样品（如辣椒油）、胶基样品（如酱类）、高蛋白质样品（如肉类）、动物油脂（火锅底料）等。
    高提取率。保证检测取得理想的结果，首先应将目标化合物从被检测的样品中完全提取出来，本标准选择正己烷和丙酮为提取溶剂，水和丙酮为分散溶剂。对于纯油基的样品（像辣椒油）采用正己烷直接溶解，可保证提取率达95%。对于水基的食品（像番茄沙司），经水和丙酮分散后采用正己烷提取，也可保证提取率在85%以上。
    高纯化性能。标准确定了中性氧化铝粉作固相萃取，利用了氧化铝对苏丹红的强吸附能力，并对油脂进行饱和性吸附。在前处理时借助极性固相萃取填料一次性将干扰和污染物最大可能除掉，有助于将油性样品中的大量油脂在随后的清洗步骤中脱除。实验表明，氧化铝可以有效脱除样品中的干扰成分，使液相谱图干净清晰。
    高浓缩倍数。由于本方法可获得纯净的目标化合物的洗脱液，因而可以任意比例进行浓缩，配合了好的提取率和固相萃取的回收率。也就是说，实际检测中可以根据需要，任意地对目标化合物进行浓缩，目标化合物不因为被浓缩而影响其纯净度，可大大降低检出限，即不会对检测结果的准确性产生影响。
    此外，本方法因除去了内源干扰，可发挥出色谱/光谱图可准确地定性定量的优势。
    本方法经全国抽检、省抽检、工商抽检、进出口企业的原料控制等数十类数百个样品的实测考察，结果表明，数据准确和判定正确，从未出现假阳性和假阴性的错误，即未发生过误判。

中国和欧盟苏丹红染料检测方法的比较

    欧盟的标准方法限于红辣椒粉的使用，在欧盟的标准方法中已注明适用于辣椒粉和以辣椒为主要成分的产品，即主要指含辣椒的食品调味品。中国的方法至今还未见到不适应的样品。由于该方法的高提取率、高纯化性能、高浓缩倍数，可同时适用于含苏丹红量多的样品（如辣椒粉、辣椒油等）和含量极少的样品（如食品成品汉堡包、香肠、肉饼等）。
    欧盟的方法仅采用乙腈为提取液，对水性基质略好（如辣椒粉），但对植物油和动物油的基质回收率约在65%以至更低，对苏丹红含量较大的样品可以使用，但不能准确定量，对含量小的样品则完全不适用。中国方法对不同基质的样品采用不同的提取，从而保证从各种复杂基体中所提取的苏丹红有最大的回收率，根据样品基质选择不同的提取溶剂，才能保证将各种样品基质中的多种苏丹红染料一并提取出来。
    欧盟方法对提取液直接上机，经有机溶剂提取后的样品溶液中含有大量的脂肪和脂溶性杂质，另外，对于辣椒和番茄制品会提取出大量的内源性色素，这些杂质一方面影响色谱的分离效果，使得色谱图上干扰很多，没有质谱几乎无法定性，还严重污染分离柱。中国方法在前处理时借助极性固相萃取填料将两类干扰物质最大可能除掉，保证定性的正确和分析柱寿命。方法简单，且选择的中性氧化铝对苏丹红类染料有很特异的吸附解析特点，自己填柱，可一步完成纯化和浓缩。在保证好的氧化铝活度时，苏丹红系列染料吸附解析率可达到100%，因此纯化后的样品在分析条件下无任何杂峰干扰，在柱纯化过程中也能保证目标化合物的回收。 
    欧盟方法受提取溶剂和不进行纯化的影响，无法进行浓缩步骤，因而无法降低检出限量。中国方法由于可获得纯净的目标化合物的洗脱液，因而可以任意比例进行浓缩，配合了好的提取率和固相萃取的回收率，可大大降低检出限。
    欧盟方法采用液相色谱—光谱检测进行定量，质谱进行定性确证，其定性定量能力均不及本方法。我们发现对于辣椒制品，即使在最稳定的色谱条件下，使用极性不同分离柱，也会出现辣椒内源物质和苏丹红的色谱峰的完全重叠，此时光谱图无法定量，使用质谱定量能力则远不及光谱。本法因除去了内源干扰，可发挥出色谱/光谱图可准确的定性定量的优势。
    欧盟方法的成本很高，分析成本来源于仪器本身成本、高纯试剂成本、仪器损耗成本和人员成本。中国方法在这几项成本中占绝对优势，在我国极易普及。

背  景

    苏丹红属偶氮系列染料，是应用广泛的化工合成染色剂，主要应用于蜡、油彩、汽油等工业领域，目前已确认了有机偶氮染料的毒性，其大多数有致癌性，包括苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ。
    我国有《食品添加剂使用卫生标准》。这项早在1996年就已发布的强制性国家标准，允许使用的食品添加剂有800多种，但不包括“苏丹红”。也就是说“苏丹红”是被国家标准禁止使用在食品生产领域的。
    我国和欧盟禁止苏丹红类染料用于食品生产。2004年6月14日，英国向消费者和贸易机构发出了警示，在超市食品中发现含有潜在致癌性的苏丹红I。2005年2月18日，英国食品标准管理局宣布收回受污染的359种食品。2005年2月23国家质量监督检验检疫总局发出紧急通知，在全国展开对含有苏丹红食品的抽查行动，要求各地质检部门加强对含有苏丹红I食品的检验和监管，严防含有苏丹红I的食品流入市场。

知  识

液相色谱－质谱联用检测法

    自2003年4月，印度出口的红辣椒制品中发现苏丹红I之日起，世界各国均对苏丹红的检测方法进行了研究。2004年1月，欧盟将辣椒制品的苏丹红的检测范围扩大到苏丹红II、苏丹红III、苏丹红IV。由于涉及样品大多是辣椒和番茄制品，样品本身的复杂基质直接干扰仪器检测，且苏丹红具有非离子性脂溶物的特点，导致样品提取、纯化、富集非常困难，采用好的提取溶剂往往造成提取液中混入大量的干扰成分，若考虑低残留量进行富集往往首先浓缩的是样品的内源性物质，结果使得干扰更为严重。由于这类染料的特点，先进国家普遍采用的研究方法是液相色谱-质谱联用技术。欧盟标准方法《辣椒粉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红和胭脂树橙的含量分析》中也使用大型液质联用仪。
    质谱检测仪具有定性优势，是我国标准发布前，检测苏丹红中常用的办法。已经报道的方法有毛细管液相－电喷雾－飞行质谱法，液相色谱－大气压化学电离－多极质谱法和液相质谱－电喷雾质谱法，均属于液相色谱－质谱联用检测法。该方法经过液相分离、光谱定量、质谱定性而最终实现对食品中苏丹红的检测。液质联用仪的先进性毋庸置疑。