关于色谱柱、色谱填料、国产替代等常见问题的解答你都知道吗？（一）

A1: 高机械强度是硅胶的特点之一。对于粒径10μm 的硅胶填料我们推荐设定80-100Bar 的压力，对于20-40μm 的硅胶填料我们推荐设定40-70Bar 的压力，来装填动态轴向压缩柱。 硅胶填料的机械强度会影响装柱及使用寿命。纳微的硅胶填料拥有卓越的机械强度，通过在DAC柱上反复装填20次，观察纳微UniSil®10-100 C8与进口同类型的色谱填料的柱压力变化（图1），可以看出UniSil®柱压基本稳定，而进口填料的柱压不断升高，显然UniSil®的机械强度优于进口填料。另外通过电镜对其形貌观察发现（图2），进口填料经装柱后出现部分破碎的情况（图2右），UniSil®填料基本无变化（图2左）。

A2：我们通常所说的孔径实际上是个统计的、平均的概念，即平均孔径，它是指累积孔径分布曲线50%处的平均孔径，或是与孔径分布曲线的最高频度相对应的平均孔径。通过测试纳微UnSil5-1000与进口同类型的色谱填料的孔径分布，得出孔径分布曲线（图3），可以看出UnSil的孔径分布较窄，而进口填料的孔径分布较宽，因而UnSil的硅胶填料孔径的控制更加精准。

A3:一般常见的硅胶填料（没有经过封端处理），pH耐受性都在2-8之间，在碱性环境下，硅胶的Si-O-Si-O结构会被破坏而溶解。即使在pH5-7的环境中，硅胶表面的Si-OH也会电离。使得碱性化合物产生拖尾，严重影响分离效果。封端处理以后可以减少待测组分与硅胶表面残留的酸性硅羟基反应，改善和保持较好的峰形，这对于碱性化合物的分离尤其重要。而不同的封端技术也会直接影响色谱柱的效能。纳微科技的硅胶填料经过特殊封端处理技术后(如UniSil Ultra系列产品），使得填料的pH耐受性有所提高（pH 2-10）,并且覆盖硅胶金属杂质还可以减少碱性化合物的拖尾，增强峰型对称性。

通过在同等条件下，对UniSil Ultra与同类型的进口硅胶填料进行碱（pH10.0）冲洗，可以看出UniSil Ultra比同类型的进口D硅胶填料可以耐受更多次数和更长时间的强碱清洗（图5），从而证明UnSil Ultra的的耐碱性更强，使用寿命更长。

碱洗条件：MeOH/TEA (pH=10.0)=40:60

冲洗体积：60CV

柱效测试：流动相：ACN/H2O=60:40

柱温：35℃

样品：甲苯

A4:(1)选用经封端处理的色谱柱，可以防止碱性化合物的拖尾现象。

(2)选用含碳量高的柱子，可以增加保留值。（还要综合考虑孔道结构和空间）

(3)选用小颗粒的填料，可以提高分离度。（还要综合考虑压力和设备投入）

(4)分子量大的组分选用大孔径填料的柱子。

(5)纳微可以根据不同的样品条件提供不同规格的C18填料，例如常规的UniSil®C18, 耐碱性较强的UniSil® C18 Ultra,以及适用于100%水溶液的UniSil® C18 Polar等。

A5: 多肽一般还是可以用C18的，根据分子量不同可以选择150?、300?的孔径，有些小肽用100?也可以。在C18上保留太强时，C8，苯基，C4，C3也都可以用于多肽的分离。三肽也可以尝试100? C18，不过小肽往往极性偏大，普通C18上可能没有保留，这时需要使用亲水型C18或Hilic模式。

以下是为大家推荐的纳谱ChromCore的色谱分析柱产品：

（1）分子量较大的多肽（2000D以上）可以优先考虑纳谱ChromCore C18，ChromCore 300 C18。

（2）小肽可以用ChromCore 120 C18，如果无保留，选择亲水型C18或Hilic模式。

(3) C8系列有ChromCore 120 C8、ChromCore C8、ChromCore 300 C8、ChromCore AQ C8（亲水型)。

(4) 苯基系列有ChromCore Phenyl、ChromCore PFP、ChromCore Biphenyl。

(5) C4系列有ChromCore C4、ChromCore 300 C4、ChromCore 300 C4-T。

(6) 亲水型C18可选ChromCore AR C18、ChromCore AQ C18、ChromCore Polar C18。

(7) Hilic模式可选ChromCore HILIC-Amide、ChromCore HILIC-Imidazole、ChromCore Diol、ChromCore CN等。

A6：这个问题我们请纳微科技专门负责手性产品的朱总解答

（1）手性柱使用的填料介质是大孔多孔介质，生产工艺复杂；（2）在介质上涂敷或键合的手性位点官能团生产工艺复杂；（3）官能团与介质基球涂敷或键合工艺难度大，且工艺复杂；（4）装柱工艺及成本也较高。这些都导致了手性色谱柱比普通反相柱价格高出很多。纳微科技手性填料包括OD、OJ、OZ、AS、AJ 5个型号的产品，手性色谱柱从填料的生产（包括直链淀粉产品研发）到装柱一系列过程都是自己完成，所以和国外相比，性价比更高，另纳微还可以提供手性拆分纯化服务。

A7:色谱柱技术包括填料技术和装柱技术，填料是色谱柱的心脏，填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术也没有想象中的这么简单，不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度，装柱工艺都有所不同，要装出紧密、稳定、均一的柱床，需要经验积累。纳微有专门提供装柱培训的课程。有兴趣的朋友可以联系我们。

很多人都认为国内和国外的色谱柱差距很大：原因在于国内的的公司都不会自己开发填料，一般都会买国外现成的填料装柱，填料质量控制权不在自己手里。另外，对色谱柱性能很关键的基础材料——裸硅胶，国产的还不过关，在纯度、粒径和孔径的均一性方面和国外产品相比，差距很大。

正解来了：