2017/07/20 18:17
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检 验 方 法
A. 1 一般规定
本标准除另有规定外,所用试剂的纯度均为分析纯,所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂
及制品,应按 GB / T601 、 GB / T602 、 GB / T603 的规定制备,试验用水应符合 GB / T6682 中三级水的规
定。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时,均指水溶液。
A. 2 乳铁蛋白占总蛋白质量百分比的测定
A. 2. 1 方法提要
采用高效液相色谱法,在选定的工作条件下,于紫外检测器 280nm 处通过色谱柱分离测定乳铁蛋
白,面积归一化法定量。
A. 2. 2 试剂和材料
A. 2. 2. 1 水:符合 GB / T6682 的一级水。
A. 2. 2. 2 乙腈:色谱纯。
A. 2. 2. 3 氯化钠溶液: 0. 9% 。
A. 2. 2. 4 1% 三氟乙酸溶液:吸取 1mL 三氟乙酸,加一级水定容至 100mL ,过 0. 45 μ m 滤膜。
A. 2. 2. 5 乳铁蛋白对照品:纯度 ≥95% 。
A. 2. 2. 6 0. 45 μ m 微孔水相滤膜。
A. 2. 3 仪器和设备
高效液相色谱仪:配备紫外检测器。
A. 2. 4 参考色谱条件
A. 2. 4.1 色 谱柱: AlltechprosphereC4300A ( 150 mm×4.6 mm ), Alltech All-guardTM Guard
(
7. 5mm ×4. 6mm )或具有同等性能的色谱柱。
A. 2. 4. 2 检测波长: 280nm 。
A. 2. 4. 3 流速: 1. 0mL / min 。
A. 2. 4. 4 柱温: 35℃ 。
A. 2. 4. 5 进样量: 50 μ L 。
A. 2. 4. 6 流动相梯度洗脱参数见表 A. 1 。
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