一年一度的ARAB LAB（阿拉伯实验室仪器展）于2015年3月23日-26日在美丽的阿拉伯联合酋长国第一大海滨城市迪拜举办。本公司携带东胜龙ETC811PCR仪参加了本次展会，这也是苏州东胜兴业公司成立以来首次参加的海外展会，也是东胜龙PCR仪首次国外亮相。         在本次展会上，我们共接待意向客户47个，大部分来自海湾地区，包括：印度、巴基斯坦、伊朗、土耳其、斯里兰卡、埃及等国家，也有少数的欧洲及东南亚国家，如意大利、西班牙、俄罗斯、泰国、印尼等。PCR仪人性化的设计得到了大家很好的认可。         展会期间，我们和来访客户进行了PCR技术和商务交流，并现场演示东胜龙ETC811PCR仪,让客户体验了我们仪器的操作方法和设计特点。值得一提的是东胜龙ETC811PCR仪的外观设计以及精良制作得到了客户的普遍认可，这一点和去年的上海慕尼黑展会上客户的评价完全一致，这一点大大增强了我们的仪器走出国门的信心。两台演示机第一天就被伊朗客户果断预定，也想购买的埃及客户只好遗憾的空手而归。         这次展会，我们不仅是对东胜龙ETC811 PCR仪产品本身的宣传，也是东胜品牌在国际市场上的第一次公开亮相，必将对产品的海外市场拓展起到极大的推动作用。通过参展，我们还了解到了整个行业的发展方向以及竞争对手的发展动态，这将有助于我们把握市场动态、调整产品结构和制定适当的营销策略。  

PCR仪是一种在实验室使用频率及使用时间非常高的仪器，因此故障率也是比较高的。PCR仪的故障主要有以下几类：1、制冷半导体故障2、温度传感器故障3、控制板故障4、电源板故障5、热盖故障6、软件故障7、其他故障下面就这几类问题做简单分析。1、制冷半导体故障制冷半导体故障率与制冷半导体的质量、温度变化次数（循环次数）以及制冷片防水等都有关系。制冷半导体是PCR仪的核心部件，PCR仪用的制冷半导体都是工业级PCR仪专用的半导体片，主要是能耐大的温度变化。但这些制冷半导体的生产都是半手工的，也没有很好的办法来检测其耐用性。总之是有一定的故障率的。制冷半导体的耐温度变化次数是与其材料及生产技术相关的。如陶瓷片切块、非硬性焊接等技术。好的制冷半导体生产商会提供温度变化次数实验数据。其性能随温度变化次数会下降。有的PCR仪具有温度变化次数计数的功能。制冷片保持低温（如4度）时，冷面会凝集水。因此制冷半导体片需要防水（这道工序厂家是要收费的），其周围环境也需要防水。防水做得不好，制冷半导体片进水，其寿命会大大减少。中国南方的PCR仪用户常发生4度过夜后制冷片故障。因此，不需要4度过夜的最好别4度过夜。原美国MJ公司的PTC200是环境防水而制冷半导体不防水，东胜龙811是双防的。2、温度传感器故障PCR仪用的温度传感器是大致有三类，即热电阻型、热电偶型和半导体型，热电阻型、热电偶型用得多，故障率较低，而半导体型的因为内含电路，在PCR仪中使用时故障率较高（当然它有其他的优点）。有的PCR仪会报传感器故障，其实传感器、与传感器相关的线路以及传感器信号处理电路的故障都有可能。3、控制板故障控制板是PCR仪的指挥中心，其比较容易受到外部因素的影响而出现故障，如灰尘过多引起控制板温度过高、湿度过大引起电路短路、串扰（从电源线来）及电磁幅射（无线）的干扰等。进口PCR仪一般在欧美等发达国家的故障率很低而在中国的故障率高，主要是没有考虑中国北方多灰尘和南方高湿度的实验室环境。东胜龙811PCR仪采用了控制板三防处理以及多种有线和无线电磁屏蔽的手段来防止其发生故障，收到很好的效果。4、电源板故障电源板故障主要来自于电源的品质不好（不同级别的电源价格差别较大）以及供电的环境不良。低端PCR仪的电源的故障率会比较高，其对供电环境不好的耐受力较差，如电压大的波动以及杂波等抗干扰能力不足。5、热盖故障热盖一般是在运行时保持105度左右的。据我了解可大致可分为三种，电热膜型、电热丝型及电路板型，电热膜型的成本较低，但其与热盖金属板的附着以及电热膜接口的引线都很难做好，因此故障率较高。电热丝型是将发热丝埋在导热硅胶板中间，用胶水贴到热盖金属板上，故障率也较高。东胜龙811PCR仪采用的是电路板型，用导热固化胶将电路板与热盖金属板固化到一起，引线直接焊线，因此故障率为零，但人工及材料成本较高。6、软件故障即所谓的软件Bug等，一般通过软件更新来消除。7、其他故障如元器件故障、焊接不良等。东胜龙811PCR仪采用电路板冷热冲击（-10度至60度反复变温24次，每次1小时）以及72小时老化实验（环境温度30度左右）来筛选，大大降低了开箱故障率。其中前三类故障，即制冷半导体、温度传感器以及控制板故障的维修会影响PCR仪的温度性能，需要用专门的多温度探头的测温仪以及配套软件进行测温和温度校准，一般需要在厂家完成。以后再详述。

早期的PCR仪是没有热盖的，通过在PCR反应液中加入石蜡油（或矿物油）来防止PCR反应液蒸发。但反应完成后石蜡油不好除干净（我做实验时是将PCR反应液与石蜡油一起冷冻，取出后用手将管捂热，石蜡油先化开，立即将石蜡油用枪吸出。但并不能完全吸干净）。后来出现了带热盖的PCR仪，热盖的作用并不是防止蒸发，而是防止蒸发的水汽在管盖上凝结。反应液中的水份还是会有部分变成蒸汽在管中，只是不会凝结在管盖上（如果没有热盖也不加石蜡油，反应管中的水份会全都凝结在管盖上的）。PCR仪的热盖大致可以分为以下四种：非可调式热盖、可调节式热盖、自适应式热盖和自动式热盖1、非可调式热盖：即热盖并不能同时适用于高管和矮管，如AB的2720等只能用高管，用矮管得手工加铝块；2、可调节式热盖：即热盖的高度可以手工调节，同时适用于各种高管和矮管，但压力需要自己感觉，用力过小或过大都可能会有麻烦，如MJ公司的PTC200。因为有这个问题，后来又出了力矩式可调热盖，即热盖旋转到一定力矩后内置机构打滑，从而保证一定的热盖压力。如东胜龙的黑金刚以及Biometra等。这类热盖打开前最好旋松热盖，否则下一个用户如果直接下压热盖，可能造成部分PCR管变型。但很多用户会忘记松热盖。3、自适应式热盖：即热盖自带预压紧的弹簧，通过与打开和关闭热盖的手柄机构相结合，达到压手柄时自动压紧热盖，开手柄时自动松开热盖，自适应高管和矮管，不用担心压力和没有松开热盖等问题。如东胜龙二代的ETC811型PCR仪。4、自动式热盖：即热盖是由电机来控制的压紧与松开的。一般用于与实验室自动化相配合的PCR仪，或称为全自动PCR仪，如原MJ公司以及Biometra公司都有此类PCR仪，但价格都较高。

带病坚持工作的同志是好同志，“带病”坚持工作的仪器不是好仪器，PCR仪也是如此！因此PCR仪带有自检功能是非常重要的。从自检功能来讲可以将PCR仪分为三个层次：无自检功能、开机自检功能、实时自检功能。以制冷半导体故障为例：无自检功能：仪器正常运行，实验结果不好，找试剂原因N长时间，最后想到仪器问题再请人检测确认。开机自检功能：仪器正常运行，实验结果不好，找试剂原因。重开机，报错，不知上一次是不是仪器原因。实时自检功能：仪器运行过程中或运行完成后报错，实验结果不好，可能是仪器原因。东胜龙811型PCR仪具有实时自检功能，主要包括以下几个方面：1、模块温度是否正常（不必解释）2、环境温度是否正常（可防止因进出风口阻塞和灰尘过多造成仪器内部温度过高，811有机内温度传感器）3、散热器温度是否正常（散热器温度过高时升降温度速率会异常，可能是风扇故障等）4、热盖温度是否正常（热盖温度过低会引起蒸发，过高会使PCR管变形，但设置错误只能从811的界面上看了，仪器不会报错的!)5、程序运行过程中的异常操作（如被人有意无意的暂停、跳过或提前终止等）这些结果都会在东胜龙811型PCR仪运行完成后的简要报告中的汇报出来。当然如果异常值达到“异常”的程度，东胜龙811型PCR仪会自动停止运行。东胜龙811型PCR仪不仅仅进行PCR扩增，还尽量保证每一次PCR扩增都是高质量的。它不会“带病”坚持工作的！

PCR实验室污染是常见的现象，主要原因在于长时间扩增同一个PCR产物且防护措施不到位。PCR实验室污染的典型现象就是PCR扩增的阴性对照（不加模板）变成阳性，且扩增片段是我们所要的目的片段。PCR扩增是将一段核酸片段扩增到上百万倍的过程，且扩增产物大都是较小的分子，因此在后期的电泳及加样等操作过程中很可能产生气溶胶，扩散到取液器、试剂甚至整个实验室中。为了减少这种现象的发生，一般PCR扩增及后处理室要与提取及PCR加样室在空间上分开，理论上越远越好，另外在气流上要防止PCR扩增及后处理室的空气回流到提取及PCR加样室。如提取及PCR加样室采用正压，而PCR扩增及后处理室采用负压，且进风口与出风口不要太近等。两个实验室的仪器也不要交叉使用，特别是跑电泳及后处量的取液器不拿到提取及加样室用。一般的研发实验室不太注意，而医疗用的PCR实验室则有严格的规定，需要学习的可以上网去查国家的相关规定。有一家国外的PCR实验室要求到过扩增室人员当天不能进提取及加样室。预防是最好的办法，但如果不小心还是发生了PCR实验室污染，可以采用以下几个办法：1、在本实验室停止本引物的扩增一段时间。一般一周以上，时间越长越好。一则是不要再生产污染源，二则通过一段时间，污染实验室的DNA片段自然降解。2、通风。将污染物扩散到实验室外面。3、用移动式紫外消毒灯适当照射实验室。但不太可太时间，大部分的塑料制品都经不起长时间的紫外照射。4、将PCR实验用过的引物甚至样本等处理掉。酶、水、buffer等可用于其他PCR实验。5、以前在电泳及PCR产物后处理实验中用过的取液器等都还回去。PCR实验室污染是件很讨厌的事，一定要有耐心等待一周以上。不要因为着急而不断扩增，不断证明发生了PCR实验室污染。如果是做检测类的实验，可以考虑采用UNG酶系统来防污染。即将dTTP更换成dUTP，这样扩增产生为含U的DNA。在PCR反应液中加入UNG酶，将污染的含U的DNA降解，而常规模板DNA不会被降解。

PCR扩增后一般进行琼脂糖凝胶电泳分析，电泳后一般有以下几种条带：1、引物带。引物浓度过高或是扩增效率不是特别高时都会有，一般不呈现为细带，为发散状；如果目的扩增产物带和引物带都很亮，可以考虑适当降低引物量。2、引物二聚体带。比引物跑得慢一点，条带清晰，但如果扩增产物小于100bp时，产物与引物二聚体就不好分别了，建议采用DNA聚丙烯酰胺电泳（不是蛋白质的SDS聚丙烯酰胺电泳）；如果引物二聚体在优化复性温度后仍然严重影响目的产物的扩增，优先考虑更换引物设计（因为引物合成的成本比反复优化条件的成本低）3、目的扩增产物带。其大小与设计大小相同，条带清晰。4、非特异扩增产物带。其大小与设计大小不相同，条带清晰。一般考虑通过提高复性温度来减少或消除（也可用温度梯度功能来寻找最佳的复性温度，东胜龙811型PCR仪就有此功能）。如果其片段大小比目的片段大较多，可以通过减少延伸时间来减少或消除（即不给它足够的延伸时间）。还有一种非特异扩增产物带是来自于逆转录PCR实验时的基因组DNA的污染，如果目的扩增产物中有内含子，扩增产物很可能大于目的基因。这种条带通过优化复性温度是不能消除的，可以在逆转录前用无RNA酶的DNA酶进行样本处理。5、模板DNA带。模板浓度过高时可能出现。如果是基因组DNA为模板，条带可能会很乱且较大。一般进行PCR扩增时，模板浓度都不要太大，否则会产生一些比目的基因长一点的杂质DNA（可能不成条带，也看不到），这是由PCR扩增原理造成的。

在PCR仪上完成一个PCR反应所需要的时间决定于以下几个因素：1、模块升温和降温时间2、模块与PCR管内温度平衡时间3、延伸时间4、循环次数下面就以上几点做一点分析，以便大家了解快速PCR技术与快速PCR仪的区别。1、模块升温和降温度时间PCR仪一般会标明升温速度和降温速度，但标的大多是最大变温速度，也就是说是瞬间达到的速度。而与实验相关的平均升降温速度只有极少量厂家标明。以平均2度和4度（能做到平均升降温4度的仪器极少）来计算，从95度降到55度，分别是20秒和10秒，每一个循环差20秒钟。以一般35个循环来计算，影响实验时间700秒，也就是不到12分钟。实际还要考虑过冲问题，影响时间还会少些。2、模块与PCR管内温度平衡时间模块温度达到后，PCR管内的温度远没有达到（塑料和水的导热系数比铝块差300倍以上），需要时间来使二者达到平衡。一般有四种办法来减少这一时间，一是让模块温度过冲，在管内温度快达到时降到目标温度，但太高的过冲可能造成实际温度过冲，影响PCR反应结果；二是减少PCR反应液的体积，但体积变小时PCR反应的可靠性会降低；三是降低PCR管的厚度，但太薄时强度不够；四是增加PCR管与模块贴附程度。3、延伸时间延伸时间与PCR产物的长度和DNA聚合酶的合成速度有关。如果PCR产物长度少于100bp时，可能考虑将延伸时间变为0（即两步法）；采用高速的DNA聚合酶也是常用的方法，但并不是所有PCR实验都可以用高速的DNA聚合酶。4、循环次数循环次数与模板量及检测要求相关。所谓快速PCR技术是将快速PCR仪与超薄管（或特殊贴附技术）以及高速DNA聚合酶等技术整合在一起，可达到较短时间完成PCR反应。而一些厂家在向用户推销PCR仪时，不去说明快速PCR技术，只强调PCR仪速度快（大都用最大升降温速度来HuYou用户）。好像买了快速PCR仪后，原来1个半小时的扩增时间变会缩短成半小时似的。而用户采购了快速PCR仪后才发现并不那么回事。有不少用户采用快速模式根本就做不出好的实验结果。特别是进行多重PCR扩增的用户，如公安系统用于身份鉴定的试剂。快速PCR技术与快速PCR仪是两回事。快速PCR仪最多只能缩短PCR反应时间10分钟左右，要实现真正的快速PCR反应，还需要其他一些努力。大多数用户根本就不需要快速PCR技术。

PCR仪是一种在实验室使用频率非常高的仪器，因此故障率也是比较高的。PCR仪的故障主要有以下几类：1、制冷半导体故障2、温度传感器故障3、控制板故障4、电源板故障5、热盖故障6、软件故障7、其他故障下面针对这些故障的维修对仪器性能的影响做简单介绍1、制冷半导体故障由于制冷半导体是半手工生产的，每一片制冷半导体的性能都不一样。用于PCR仪生产的制冷半导体都是需要配对的。一般大的生产商会通过较大量的制冷半导体的性能测试后选择性能非常接近的组成一组（每台PCR仪用几片制冷半导体就是几片一组），如东胜龙811PCR仪就是三片一组。也就是说制冷半导体故障后应该一组全部更换。但大多数维修都是只更换其中一片，这样会造成温度的不均一（如像2720一样有四片制冷半导体却只有一个传感器）或是温度升降温的不均一（如像东胜龙811PCR仪一样有三片制冷半导体有三个传感器）。三片制冷半导体的更换还涉及到整个控温模块的组装，这是一个技术活。要保证仪器的温度性能，组装的工艺要求是很高的，有些还需要特殊的工具或夹具。组装不好会影响温度均一性、升降温速率甚至仪器的使用寿命（内部可能会过温、进水等）。这也是为什么PCR仪的生产商都要求返厂维修的原因。东胜龙也是如此。2、温度传感器故障温度传感器一般通过导热硅脂或导热固化胶与模块实现高导热。更换至少需要注意以下几点：同一品牌同一类型的温度传感器；与原厂同样的导热材料（硅脂或固化胶）以保证传热效率相同；与厂家同样或类似的测温与校准方式。同时更换温度传感器时，大多仪器都要拆开整个控温模块，因此由生产商来完成组装为最好。3、控制板故障控制板维修主要是要注意用与原厂相同的类型的元器件。如果维修涉及到与温度传感器相关的电路，需要进行温度校准。4、电源板故障电源板维修也是主要要注意用与原厂相同的类型的元器件。维修不好与仪器温度性能关系不大，但与仪器的使用寿命有关。5、热盖故障热盖故障一般为加热器件故障或传感器故障。加热器件最好选择原厂的，但装配是有一定技术的，装配不好会影响热盖的均一性和寿命，东胜龙811PCR仪的热盖是通过专门的红外热成像仪来做质控的。温度传感器用与原厂相同的类型的元器件即可。但温度保险的安装方式一定要注意，有些厂家用的是圆筒型的保险，与热盖的贴附不太可靠，很可能在热盖传感器故障时起不到应有保险功能而引发热盖超过温或起火。东胜龙811PCR仪用的是方型保险，通过导热固化胶固化到热盖板上。6、软件故障软件故障一般都是通过更新软件即可消除。一般不会影响仪器性能。7、其他故障这些故障与仪器性能的关系就不好讲了。

前一段时间在百度中搜索，发现多年前写的一个关于荧光定量PCR技术的PPT有很多人看过或引用过，后来又听见一些认识的人也说，近来也就觉得自己对社会有点看得见的贡献了。考虑到自己作为荧光定量PCR仪的技术支持人员已经工作了五年了，做的实验以及解决的问题远比五年前多了，因此利用过年的时间，写点荧光定量PCR实验中的一些注意事项及感想，无论对错，都是希望对相关的人员有些参考价值。荧光定量PCR原理等大家都已经很熟了，我就不细说了，主要是写一些有人问过的事，希望写的内容是大家都关心的。普通PCR与荧光定量PCR技术区别？简单的讲PCR技术最早是用于扩增一段特异的PCR片段，用于克隆、测序等实验，后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或非很粗的相对定量，而荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量，是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。前些年有人讲过普通PCR后，通过电泳也可以进行定量，其实是将PCR产物的定量与PCR样本中模板定量相混了。近两年没有人再讲这类的话了。SybrGreen、Taqman、Molecular beacon、LUX这些方法如何选择？从实验成本来讲，SybrGreen是最好的，基本上就是普通PCR加上一点SybrGreen I 荧光染料即可，其信号强度也很好，还可以进行融解曲线分析等，但缺点是只能在一个反应管内进行一种PCR反应的检测，另一个问题是非特异性扩增会影响实验结果，当然也有一些技术解决这些问题，后面会讲到。对于研究人员来讲，如果需要检测的基因很多，而每个反应管中进行一种PCR反应的检测可以满足实验要求，则Sybr Green是最好的选择。如果需要进行多通道实验，即在一个反应管中进行2种或以上的反应，则要选择其他的方法，最常用的是Taqman、Molecular beacon，这两种都是探针的方式，由于增加了探针的特异性，因此其扩增曲线反映的就是特异性产物的扩增曲线，不含有非特异性扩增的成分。因此商业用途的检测试剂盒大都采用这一技术，以减少非特异性产物造成错误结论的可能性。其缺点在于探针成本较高，有时设计的探针并不合适，有造成损失的可能性。并且要进行较多的实验条件的优化。这两种探针技术用于商业目的时都有专利问题，据说取得Molecular beacon的许可权的成本相对较低，但只是据说。另一种值得一提的是LUX探针，它也可进行多通道实验，但它没有Taqman和Molecular beacon方法的增加探针特异性的功能，因此只能是一种折中的方案，如果不考虑多通道实验，则不如Sybr Green法选择单通道实验还是多通道实验？这是要根据实验需要来选择的，如果有一个、两个或是三个基因要进行比较，并用看家基因进行对照，可以考虑选择多通道实验。多通道实验的好处是可以消除样本加样的误差。但要克服的困难也比较多，一是条件的优化比较麻烦，即多种PCR反应以及探针要在同一个反应条件下进行，并且效率都要比较高，另一个困难是要求相互之间没有干扰，因为干扰会影响到实验结果。还有一个困难是当一个基因的模板数显著大于其他基因时，因为共用核苷酸等资源的原因，会让模板数少的基因的定量值变小或变为零。因此一般两通道的实验比较多些，即一个基因进行多样本比较，用看家基因进行对照。可以看出，如果单通道实验可以解决问题，就不要选择多通道实验了。三个以上的基因进行比较时就最好用单通道。因为一般的仪器最多也只有四个通道，就是有更多的通道，实验条件的优化也是足够麻烦了。双通道实验时如何克服反应条件、干扰以及模板数差别很大等困难？对于反应条件的优化，可通过两个单独实验的标准曲线来优化，主要是复性温度，可用PCR仪的温度梯度功能来选择，然后找到一个合适的复性温度。对于如何确定是否存在相互干扰，则要通过两个独立的单通道实验与双通道实验的结果进行比较，如果差别不大，则表明没有干扰。至于模板数差别很大的问题，可以通过降低引物浓度的方法来实现，即primer limited，在一般的PCR反应中，引物的浓度是足够高的，基本上可以将反应液中的核苷酸全部消耗尽，在优化引物浓度时，用不同的引物浓度进行实验，找到不影响反应的C(t)值的最低引物浓度。这样在实际反应中，模板数高的基因在引物耗尽后，反应液中仍然有足够的核苷酸等用于另一个基因的反应。引物设计中的几个注意事项1、 引物设计最好用相关的软件来进行设计，考虑引物自身回折、错配、引物二聚体、复性温度、产物变性温度等问题，其中产物的变性温度是大家不太关心的问题，但有些产物在一般的95度条件下不能充分解链，会严重影响实验结果。2、 引物所设计的片断一定要有足够的特异性，选择好片段后，最好到互联网中进行相关的搜索，看在样本的基因组有没有相拟的基因以及假基因等，如果有，则可选择特异性更高的区域。3、 在进行mRNA表达量的定量，可以在引物设计时考虑基因组的污染问题，即在引物设计时让两个引物跨一个内含子，这样基因组污染所造成的扩增可以区别出来，或因为片段过大而不能扩增4、 由于mRNA表达量的定量有一个逆转录的过程，如果逆转录是用poly（T）作引物，则设计的片段尽量靠近poly（A），以免逆转录的效率影响到实验结果。如果用特异性引物进行逆转录，则要考虑引物区是否存在RNA二级结构的问题5、 产物片段的大小：定量PCR一般产生片段都不大，不会超过600bp。Sybr Green法一般选择250-600bp，过大会影响到PCR扩增的效率，过小则很难通过融解曲线与引物二聚体分开，但并不是绝对的。Taqman法的扩增片段都很小，几十或是100多，这是其原理造成的。Molecular beacon法对片段大小的要求不高，只要不是太长即可。Sybr Green法的实验策略：实验可分为三个阶段，即实验条件的优化、预实验和正式实验。一、 实验条件的优化阶段，这一阶段是最花时间的，1、 要找到一个阳性的模板，可以是克隆有基因质粒、强阳性样本或纯化的PCR产物等。有了阳性的模板才能进行最基本的定量扩增实验，如果有普通PCR的实验条件，也可以此为基础进行实验。2、 扩增出的产物要通过电泳方法确定其大小，以确认定量PCR扩增的产物是你的目的基因，有些用户就发生过优化了几天的条件才发现扩增片段的大小不对，不是自己想要的基因。当然，能测个序什么的最好。并通过融解曲线实验来确定产生的Tm值以及所用的变性温度是否已经足够，个别情况下会出来解键不充分的现象。3、 有了基本的PCR条件后，要将阳性模板进行倍比稀释，一般用10倍稀释。将稀释的模板带上阴性对照，分成多份进行温度梯度实验，对复性温度进行优化，以找出复性温度范围，复性温度最好能满足以下条件：高中低模板浓度下PCR扩增效率都很高、阴性模板没有扩增。选择满足条件的中间温度，这样可以提高实验的稳定性，不会因为样本管在加热模块中的位置不同而影响实验结果。4、 如果找不到合适的条件，如引物二聚体过多，可对引物浓度、Mg2+离子浓度、DMSO含量等进行优化，然后再进行复性温度梯度实验。其中Mg2+离子浓度、DMSO含量都会影响Tm值以及所用的变性温度。二、 预实验阶段按照优化的条件对所需要分析的样本做一个没有重复的实验，每个样本做一个10倍和100倍稀释的实验，预实验的目的主要有两个，一是了解样本的模板浓度范围，如果有样本的模板浓度在标准曲线之外，如过高或过低，则可能要对标准曲线进行重新优化，当然，如果过高和过低不影响你的实验结论则可定为高于多少或低于多少，直接进行外推是不科学的。另一个目的看样本中是否有PCR抑制物的影响，如果每个样本的定量结果与其10及100倍稀释后的样本的结果相同，则表明没有抑制物的影响，如果不同，如原倍结果为零，而10及100倍稀释后的样本的结果为阳性，则表明样本中PCR抑制物浓度较高。可用其10及100倍稀释后的样本进行定量。有几个用户发现过实验为阴性的样本在其10及100倍稀释后的样本为阳性的，也许有更多用户没有进行这样的实验，得到了错误的结论。因为样本RNA的提取试剂中经常有抑制PCR反应的物质，清洗不干净就会影响到定量PCR反应。三、 正式实验阶段然后就可以进行正式实验了，只需要将每个样本作三个或更多的重复即可以了。有抑制物的样本先进行稀释，计算浓度时不要忘记就行了。最后就可以进行实验结果分析了，个别样本中离群的数值可以删除。SybrGreen法的注意事项1、 最好按照上面提到策略进行实验，以免造成不必要重复实验，从而降低实验成本2、 Sybr Green I一般是先将母液用DMSO进行稀释100倍，最终的使用浓度为4000-10000分之一。可能不同的Sybr Green I母液的稀释倍数不同，可通过实验来证明，但高浓度的SybrGreen I肯定会影响PCR反应。另外用水稀释后的SybrGreen I保存的时间很短，一般1周后就不能用了。DMSO似乎反复冻融会影响性能，但原因不明。3、 在对引物浓度、Mg2+离子浓度、DMSO含量等进行优化后仍得不到满意的结果，特别是引物二聚体很多时，可以考虑更换引物，因为引物成本低，而优化实验成本很高。4、 当有少量引物二聚体影响荧光结果时，可以提高荧光读板时的温度来消除引物二聚体的影响，如将读板时的温度提高到82度，此时引物二聚体已经解链而产物没有解链。但引物二聚体浓度很高时会严重影响PCR反应，消除引物二聚体的影响也没有用。5、 大家都知道进行绝对定量需要标准曲线，有些用户认为进行相对定量时就不需要标准曲线了，可以通过2ΔΔC（t）来计算，但这一计算是有条件的，即所有荧光定量PCR扩增的效率都接近于100%，可以通过实验来证明。但大多数用户并没有进行这样的实验就直接用2ΔΔC（t）来计算了。这是错误的，会得到错误结论。6、 无论是使用自配的试剂还是用商业的荧光定量试剂盒，最好买够试剂，以免进行预实验或正式实验时没有试剂而必需采用其他试剂，由于不同试剂的缓冲液成份有较大差别，如有的试剂中含有DMSO及Mg2+离子等，可能会影响到实验结果，甚至要重新进行实验条件的优化。7、 不要在管盖上写字，原因很明显，但有些用户习惯了写字，后来再擦掉，也会对实验有些影响。8、 最好使用高质量的PCR管，低质量管的管间差可能会很大。9、 每次实验一定要有阳性对照和阴性对照，以免出现问题时找不到原因。10、 在样本很珍贵时可以采用对样本进行稀释的方式进行定量。只要浓度不是太低，理论来讲对稀释是不会影响实验结果的。其他方法也可以采用类拟的策略，以节约成本，提高效率。想到的内容就这些了，希望大家多批评指正。北京东胜创新生物科技有限公司聂尚海二OO七年元月二十五日

PCR新手指南：PCR仪的三种控温模式在进行PCR仪中控温模式设定时，一般有三个选项：Block、Tube及Probe。下面就这三种模式种简单的介绍：PCR仪的温度传感器一般是在模块下面的，也就是说仪器实际能够控制的是模块的温度，Block模式指的就是仪器以控制Block的温度为目的，也就是说你输入95度5分钟，则模块的温度达到95度后开始计时，5分钟后完成。这是最基本的控温模式。但是，实际上我们输入95度5分钟是希望PCR管内的温度达到95后开始计时5分钟。PCR仪器开发人员可以先将模块温度控制到97度（比如而已，如果不超过95度，管内温度可以很长时间才能达到95度或根本达不到），过几秒钟后，等到管内温度达到95度，再将模块温度降到95度。这样做既达到了管内温度到95度，且速度较快。但过冲的温度量与时间及PCR管的导热系数、PCR反应液的体积都有关系。这就是各个PCR仪厂家的核心技术了。这种控温方式就称为Tube模式。如果直接将一个温度传感器加入PCR管中，直接测量PCR管内的温度不是也可以吗？这就是Probe模式，也就是在一个不进行PCR反应的管内放入一个温度探头，仪器根据温度探头测到的温度来控制PCR管内的温度。但传感器的数据检测、分析及反馈是需要时间的，这种控制模式不一定比Tube模式好，而且如果反应体积发生变化时，就比较麻烦了。因此，如今的PCR仪就都是Block和Tube两种模式了。如果是正常的PCR反应，一般选Tube模式。如果是长时间保温且对温度过冲要求很高，则可以考虑用Block模式。

各种热启动酶存在的意义市场上热启动的酶种类很多，但新手并不完全了解热启动酶存在的意义。非热启动的Taq酶在较低温度时也有活性：我有一本1992年出版的《PCR基因扩增实验操作手册》中提到，酶在70度时的合成速度为60核苷/秒/酶分子，55度时为22，37度时为1.5，22度时为0.25。也就是说此时引物还没有正常配对（其可能错误配对），而酶已经开始合成了，其合成的产物就会成为以后扩增中的非特异模板。则热启动酶只有在95度高温一段时间后，其酶活动才启动起来，故名：热启动酶。这也是为什么进行PCR反应加样时，各种试剂要在低温下加样。但是不是在进行PCR反应加样时维持低温就不需要热启动酶了呢？答案是也不尽然。一般PCR仪在运行开始后热盖加热过程中，模板温度是不控制的。由于热盖的加热需要1.5分钟以上，且热盖温度一般设在105度，必然会引起模块温度的上升，一般会到30-35度，环境温度高时更甚。也就是说设计不完备的仪器也会提高非特异性反应。有些仪器的热盖在开机时就启动，这样做有可以广场烫手且用户开机后立即启动PCR程序也会造成非特异性反应。东胜龙811PCR仪的解决办法是在运行开始后热盖加热过程中迅速将模块降温到10度左右。热盖温度到达后启动程序运行。

PCR新手指南：最佳复性温度的选择标准最佳复性温度的选择标准应该是可扩增范围的中间温度。在使用温度梯度的方法寻找最佳复性温度时，新手往往会选择扩增产物最多的温度条件，然而在此后的非梯度扩增时扩增效果又不太理想。出现这种现象的主要原因是最佳复性温度的选择标准不对。本人10多年前做过数千个基因的扩增，通过温度梯度实验发现，能扩增出来的温度范围一般在3-30度。选择的标准应该是可扩增范围的中间温度。因为：1、扩增产物量的影响因素很多，有些是随机的。从定量PCR的平台期高低的不规律可以看出来。2、不同仪器、不同位置的温度及温度变化曲线是有差异的。按照仪器厂家的出厂标准也准确性+-0.3度及均匀性+-0.3度3、PCR仪进行梯度扩增时的温度准确性会更差选择中间温度可以消除仪器温度差的影响。另外，进行温度梯度时模板量的选择也是非常重要的。

当我们在96孔PCR仪上做少量PCR反应时，选择什么位置一直都是一问题，大多数用户会选择中间的孔。其实并不科学。我们选择PCR管的放置位置其实是希望选择温度最准确的位置。而温度最准确的位置应该是模块下温度传感器上面的位置（不考虑传感器温度不准的问题）。而不同PCR仪的温度传感器的位置是不一样的。比如AB的2720只有一个在中间，MJ的200有三个传感器，为左下、中间和右上，Eppendorf的应该是在A行或H行，而东胜龙811则有三个温度传感器，应选择B1-2, C1-2, C6-7,D6-7, B11-12,C11-12，因为这些点是温度准点。

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PCR新手指南：PCR现在又扩增不出来了怎么办？ 这个问题是常见的问题，就是一个PCR实验一直都做得很好，停一段时间后再做就不行了。一通乱找原因后还是不行，很痛苦！ 找问题要从大到小： 1、PCR扩增体系问题 用其他正在进行的且扩增正常的模板和引物证明PCR扩增体系没有问题，即PCR反应混合物、水、取液器、PCR仪、操作等都是好的（阳性对照） 2、引物问题 用以前扩增产物做模板（稀释50倍），证明引物没有问题 3、只是模板问题了。 因为样本降解的可能性比引物降解的可能性高得多。也可能是样本中的抑制物过多（新鲜时没有溶出来）。 不要靠运气找问题，先做第一条很重要。乱找问题常常让人失去信心的。 如果还有疑问，可以前往我的百度贴吧“PCR技术与PCR仪吧”提出疑问，将为您详细解答。或者关注我的公众微信“eastwin_mi”或者“eastwin_long”

文章由东胜创新生物科技有限公司聂尚海博士原创编辑，仅供大家参考。 影响96孔PCR仪均匀性的几大因素分析96孔PCR仪的均匀性是PCR仪的重要指标，也是实验人员非常关心的问题。造成各个孔位的温度不均匀的因素大致有以下几个：1、 制冷半导体片的不均匀2、 控温点的数量3、 边缘效应及减弱办法4、 散热器的散热均匀性5、 模块的材料及形状6、 升降温速度一、 制冷半导体片的不均匀现在的PCR仪大都是用半导体制冷片来控制温度的，其通电后一面热另一面冷，反向电极则热冷面反向。半导体制冷片虽然是工业化生产，都几乎都是手工的生产的，因此每一片都有差别，大的生产商会根据用户的需要进行配对，如一台PCR仪要三片就三片配成大致相同的阻值。阻值一般是厂家写在每片制冷片上的（自己用万用表是量不准的，因为一通电其温度就变化，阻值就会改变）因此半导体片的质量会影响PCR仪的均匀性。一般大的生产厂家出厂时问题不大，但使用一段时间后，半导体片的性能会下降，但下降程度并不一致，则温度差别就表现出来了。最大的问题是维修。半导体片本身是不能维修的。一般PCR仪都是多片半导体，普通维修会只更换其中一片，这样就会造成新的跑得快，旧的跑得慢，温度差别就大了。如果每片半导体片下面都有各自的温度传感器，则可以补偿一些，如果是像AB的低端型号2720，4片半导体片只有一个温度传感器，则问题大了。当然更换半导体片后的装配也是技术性很强的活，不经过严格的培训是做不到家的。这也是为什么大厂一般不在现场维修，而是要返厂，并且是一次性更换一套半导体片，因此成本较高。东胜龙811也是一律返厂并成套更换的。二、控温点的数量一方面半导体片本身有一定的差异，另一方面使用一段时间后性能会下降，但下降程度并不一致，还有就是边缘的和中间的半导体片的反面散热不一致（后面会讲到），这些都会造成模块温度的不均匀。常用的解决办法是在每片半导体片下面安放温度传感器，并有相应的控制电路独立控制和校准（这样做生产商的成本会上升）。如AB的9700就有三个传感器及相应的电路，而低端的只有一个。多传感器还有一个好处是可以分别控制不同的温度，产生温度梯度。三、边缘效应及减弱办法模块（指放PCR管的金属块）的边缘散热较快，一般温度偏低，即所谓边缘效应。其实散热器也有边缘温度偏低的问题。减弱边缘效应一般采用边缘辅助加热的技术，即在模块的周边加一圈辅助加热用的电阻丝或加热膜。但实际上边缘效应也不是均匀的，一是角上温度更低些，二是与散热器的风扇吹风方向也有关系（前后吹风则前后不匀，从下向上吹风则中心与边缘不匀）。东胜龙811采用的是非均匀辅助加热（已获得专利），即冷处多加热少加，有一定的效果。四、散热器的散热均匀性散热器的散热均匀性对模块温度均匀性的影响非常之大。半导体片控制的是其正反两面的温度差，每一块半导体片都是作为一个整体来控制的。如果反面的散热器温度不均匀，当然正面的的模块温度也就不均匀了。散热器的材料从理论上讲用紫铜较好，但因价格原因多为高导热的铝合金。另一个方面就是风扇散热，风扇的风力大，散热均匀性会增加，但噪音也会大大增加，如AB的仪器的噪音就非常高。如何提高散热器的散热均匀性也是一门学问。五、模块的材料及形状从均匀性的角度来讲，模块为银做是最好，其次是铜，然后是铝合金。市场上一般用的模块都是铝或银。主要是因为铜的体积比热容太大，不利于升降温速率。银也有同样的问题，因此市场上的银模块其实都是空心的。但做成空心的后，其对温度均匀性有负面的影响。因此市场上的银模块仪器的温度均匀性并不比铝合金的高，但升降温度速率要高些。由于银容易氧化，因此银模块有的是镀金的（不要以为是纯金的或是整块金或银的），有的是表面氧化处理后发灰的。铝合金的模块也有形状问题，体积大且孔间连接多有利于均匀性，但不利于升降温速率。各个厂家在模块形状上也是下了功夫的，都是一个平衡。六、升降温速度升降温速度是PCR仪的另一个重要指标（以后再讨论），升降温速度过高也会影响温度的均匀性。因为升降温速度高，模块来不急传热，半导体片差异及传热造成的温度差会更大。另外，用户使用PCR仪要的是管内的温度，而仪器能测到的是模块下传感器的温度，通过理论和实验的结果计算出来的管内温度与实际温度是有差别的，升降温速度越快，其差别也越大。总之，除了以前谈到的六大因素之外，还有其他一些影响因素，如传感器的温度漂移、温度处理电路的老化、散热器的灰尘不均匀等。有些因素可以通过定期的校准和保养来减轻或消除。 感谢您对我们东胜龙的关注，作为PCR仪知名国产好仪器品牌，东胜创新竭诚为您提供与PCR仪相关众多服务。如想关注更多PCR技术与PCR仪相关的问题，请上百度贴吧之”PCR技术与PCR仪“吧获知！

Modified from BRUCE GOLDMAN手术以后多久康复？血液会提前告诉你一切。每年有数以百万计的人接受各种大手术，但是没有人知道他们多久可以恢复。有些人几天会感觉明显好转，而对于其他人则可能需要一个月或更长的时间。对于具体某一个病人，医生也无法告诉他究竟属于那种类型。就在最近，斯坦福大学医学院的研究人员发现，在手术后的第一个24小时内，一小群免疫细胞的活性水平变化可以为预测病人的康复期提供有力的线索。基于此，他们可以预测病人何时将从手术引起的疲劳和疼痛中恢复，并重新站立起来。图一、斯坦福大学的新发现：A Fingerprint of Surgical Recovery在这项研究是基于对32个经过髋关节置换手术的中老年患者血样进行深入分析后得出的结论，该成果发表在今年9月24日发表的Science Translational Medicine.杂志上。这可能是迄今为止最全面的对于创伤后免疫系统反应特征的研究。斯坦福大学的研究者能有这一发现是因为他们使用了一个高度灵敏的技术——“单细胞质谱流式技术”。这是一种在Garry Nolan（斯坦福大学的微生物学和免疫学教授）的实验室中发展起来的新技术，它利用金属元素做为抗体的标签，质谱装置做为检测手段，可以同时检测免疫细胞表面以及内部的几十个生化特征，不但可以告诉我们这些细胞属于什么种类，还可以告诉我们他们的活性如何。图二、利用金属元素作为抗体的标签，CyTOF2质谱流式细胞仪可以对单细胞进行几十个通道的检测第一个24小时的重要线索“我们了解到，在手术后的第一个24小时，你会在血液中发现一些重要线索，这些线索为我们揭示了决定一个病人术后两周时状态的因素。”Martin Angst说，他是麻醉学教授、疼痛和手术期用药方面的专家，同时也是这项研究的共同通讯作者。图三、 Martin Angst教授这一发现可能会开创一个新型的个性化诊断方法——只需在术后检查病人少量血液样本，就可以预测他的恢复时间（斯坦福拥有相关方面的临时专利）。这种诊断可以帮助医生及早决定应该对哪位病人采用更优化的恢复方案，帮助病人告诉自己的亲人和老板大概的出院时间。充分理解研究中所发现的分子机制，可能会指导临床医生操纵免疫系统，从而让病人更快的恢复。“虽然每年超过2亿例的外科手术中绝大多数是小手术，”Angst说“但是，仅在美国，就有数以百万计的像髋关节置换术这样的大创伤手术，这些手术会引发患者显著的炎症反应。愈合与阻碍“炎症最初的爆发阶段对愈合过程非常关键，”Angst表示，“你需要释放这条‘猛龙’，但是你需要能够驾驭它。太多的炎症会导致恢复的延迟。”免疫系统的组件必须不断动态的调整自己的功能，以便加速而不是阻碍伤口的愈合。几年前，Angst参加了Nolan的一个讲座，讲座中介绍了质谱流式技术。它可以在单细胞上实现超过50种不同的表面和内部蛋白的同时测量，而标准的细胞分选流式通常最多能进行12-15个参数的测量。这个讲座促成了Angst和Nolan之间的合作，博后Brice Gaudilliere成为了他们合作的桥梁，他和Nolan的研究生Gabriela Fragiadakis一起成为本项研究的共同第一作者。图四、 Garry Nolan教授“质谱流式一次可以检测如此多的参数，这项特殊能力为研究人员提供了一个通向‘细胞灵魂’的窗口，”Nolan说，“我们不仅能识别免疫细胞的身份，还可以观察它的精神状态。”Nolan本人拥有Fluidigm公司的股权，这家公司生产了本研究中所用的质谱流式仪和相关试剂。该研究招募了32个没有其他疾病的患者，年龄大多是在50岁到80岁之间。他们都在斯坦福大学整形外科接受了初次全髋关节置换手术。研究组采集了他们的术前1小时、术后1小时、24小时、72小时以及术后4～6周的血液样本。这些样品在采集后被迅速送到Nolan的实验室进行质谱流式分析。在每个样本中大概分析了有近50万个细胞，这些细胞内外的35个蛋白的表达量都被精确检测。这些数据不但揭示了每个细胞的身份，还记录了隐藏在各个细胞内部的关键活动。图五、质谱流式技术可以实现对免疫细胞的精细分群在术后的六周内，患者每三天填写一次问卷调查，说明自己疼痛和疲劳的程度以及他们新髋关节功能恢复情况。瞄准关键指标斯坦福研究小组观察到手术后有一个“被精确协调的、细胞类型和时间特异的免疫反应模式”(Angst语)。该模式包括多种免疫细胞一连串协同的上升和下降过程，同时伴随着每种细胞内部的各种变化。“令人惊讶的是，这种手术后的表型出现在每一例病人中，” Angst说，“只是各类型细胞的数量和活性变化倍数各有不同。”有一个因素比较特别，手术后24小时与术后1小时之间，几个关键作用蛋白在一小群 “首先反应”的免疫细胞中的激活状态变化非常关键。这一因素关系到病人恢复过程中40%～60%的差异。这些“前线细胞”在手术后不久会显著增多，但和细胞内活动变化不同，其数量的增加与病人恢复时间的相关度并不强。图六、几个关键蛋白的激活状态和术后恢复呈现很强的相关性。在一个典型健康人血样中，这群细胞大约只占其白细胞总数的1～2 %，所以，使用低通量的检测技术时，它们内部的变化很容易被忽略掉。这项研究中观察到的相关性远强于以往所有关于炎症反应和临床康复关系方面的报道。这些研究一般只是监测了手术后不同时间点血液中各种分泌物的水平的变化或者不同细胞的转运情况。但是，这些研究缺乏同时观察众多参数的能力，因此无法知道在特定时间点是哪些免疫细胞正在向血液中分泌这些物质，或者此时其他类型的细胞都在干什么。预测恢复的可能途径“如果一个相关性只能解释恢复过程中百分之二甚至百分之十的差异，在临床上是可能不完全的相关，”Angst说，“而我们确凿的相关性则可能产生一个预测术后恢复的方法，这在临床中是非常有用的。”图七、利用血液检查预测术后恢复的方法有望用于临床虽然尚未证实，研究人员相信，这群活动模式与病人恢复过程最为相关的细胞群，是一个被称为“髓系抑制性细胞”的亚群，其他的研究显示它们对炎症具有抑制作用。这些细胞在癌症中起到负面作用，它们过度的活动似乎会抑制身体的免疫系统攻击肿瘤。但在手术后的背景下，他们的活动可能就是医生所希望的。现在，斯坦福的研究团队正打算看看他们是否能找出一个可以预测恢复速度的术前免疫特征。“如果我们能在术前预测病人恢复时间，”Gaudilliere说，“我们也许会看到病人受益于免疫系统的预先激活或者术前的各种干预措施，如物理治疗的等。它甚至可以帮助我们决定何时或是否应该对病人进行手术。”如果想要了解更多，请在电脑上登录东胜创新资料库网址下载学术pdf文档观看：http://s.oatos.com/hxsy3pClinical recovery fromsurgery correlates with single-cell mmunesignaturesBrice Gaudillière et al.

本次单细胞技术巡回讲座由北京东胜创新生物科技有限公司、富鲁达（上海）仪器技术科技有限公司共同发起，邀请了几位在单细胞研究领域具有丰富研究经验的学者，他们将分别从基因水平和蛋白质水平阐述单细胞技术对于生物学研究的重大意义。首站讲座于10月8日在上海取得圆满成功，到场的老师和学生对此项新技术兴趣浓厚，纷纷点赞，进行了两个多小时的讲座在师生们热烈的掌声中落下帷幕。许多听众意犹未尽，在讲座结束后与演讲者进行了长时间的技术交流和探讨，彼此受益良多。为在全国范围内广泛推广此项新技术，为更多科研工作者的科研工作扩宽新思路，本次单细胞技术巡回讲座还将在北京（10月14日）、苏州（10月23日）陆续开展，届时期待您的参加！活动日程及讲座内容安排如下，如果您对此项新技术感兴趣却遗憾无法参加，也请与我们及时联系，我们将为您提供相关技术资料。北京站：时间：2014年10月14日（周二）上午8:30-11:30地点：北大金光生命科学大楼一层报告厅讲座内容：Topic 1: Telling the Whole Story: From Single Cell Genomics to Functions and PathwaysSpeaker: Xiangxu Kong, Ph.D. | Fluidigm Corporation | Single Cell Application Specialist Topic2: Profiling immune cell populations and T cell responses in health and diseases by single-cell mass cytometry Speaker: Dongxia Lin, Ph.D | Human Immune Monitoring Center at Stanford University  苏州站： 时间：2014年10月23日（周四）14:00-16:30 地点：苏州大学独墅湖校区703号楼502室（吴中区工业园区仁爱路199号） 讲座内容：Topic 1: Telling the Whole Story: From Single Cell Genomics to Functions and PathwaysSpeaker: Zuwei Qian, Ph.D. | Fluidigm Corporation | Technique Consultant Topic2: From Single Cells to Deep Phenotypes: Mass Cytometry Helps Us Dissect the functional Complexity of Heterogenous Tissues Speaker: Xinlei Chen, Ph.D | Eastwin Corporation | Field Application Specialist 

       为期四天的第十一届中国实验动物科学年会于本月28日在重庆恒大酒店国际会议中心圆满落下帷幕，此次大会以大会综合报告和分会场专题学术交流等多种交流形式相结合，就实验动物与动物实验及相关学科进行了学术交流。       东胜创新携Bruker小动物活体成像系统，受邀参加此次实验动物设备及相关产品展示会，为参观者呈现了最完整的活体成像解决方案，吸引了众多来宾驻足垂询。除此之外，东胜创新还为大家带来了内容新颖的互动环节，微信手机客户端抽奖、3D打印技术的现场展示，更是本次年会上一道亮丽的风景线。         Bruker小动物活体成像系统，是基于最先进的多模式活体成像设计理念，制造出来的可见光活体成像平台，是市场上唯一的集荧光成像、生物发光成像、同位素成像、X光成像和白光成像于一体的多模式成像系统。        Bruker是唯一提供九种不同成像模式的厂商。机型的丰富选择，模块的自由组合，系统的持续升级，能有效地满足客户不同的研究需求和预算要求。在广泛的应用领域，为您的实验室提供先进的临床前成像解决方案。上市几年来，已经迅速得到市场的广泛认可，2010-2013年销量保持中国市场第一位。      作为Bruker多模式活体成像全国总代理的北京东胜创新生物科技有限公司，旗下分子影像事业部拥有生命科学分子影像领域专业的技术人员，为您提供最优化的解决方案和高品质的专业服务。同时，我们也十分期待与您在微信社区的互动，随时随地为您答疑解难！ 致力于生命科学最前沿技术—东胜创新分子影像微信服务号：eastwin_mi欢迎您和我们一起见证生命科学的成长   

质谱流式技术在T细胞功能多态性研究中的应用：      ----东胜创新  未完，请在以下链接下载观看全文：https://app.oatos.com/os/share.html?lc=07molo讲座视频：http://v.youku.com/v_show/id_XNzExNzgyOTE2.html销售热线：021-61374481客服邮箱：news@eastwin.com.cn官网www.eastwin.com.cn客服热线：800-810-8897 致力于生命科学最前沿技术        —东胜创新分子影像微信服务号：eastwin_mi欢迎您和我们一起见证生命科学的成长

5月29日，800余名中外专家代表云集上海第二军医大学，出席“2014国际临床和转化医学论坛”。中国工程院副院长樊代明院士、中国医学科学院院长曹雪涛院士、美国国立卫生研究院（NIH）临床中心院长约翰·加林共同担任大会主席。作为本次国际论坛的赞助商之一，北京东胜创新生物科技有限公司带来了旗下分子影像部的系列高端产品：东胜创新分子影像系列高端产品    主会场部分会场布置（从左到右---史赛克、东胜创新、诺华制药、通用电气等）  展会现场，技术人员正在给老师讲解产品技术  另外，本次展会东胜创新给大家带来了家族最新的3D打印技术，现场给大家演示3D打印技术原理，两天的展会时间，不少老师同学慕名而来东胜创新展台，一睹风采，人气爆满。   2014国际临床和转化医学论坛继续专注于国际转化医学研究前沿进展，围绕广泛关注的细胞及基因治疗、传染病和疫苗、大数据计划、代谢性疾病、监管科学、肿瘤防控、免疫相关疾病、基因组与糖组的互动、药物创新及生物样本库等议题展开专题讨论。我们相信，论坛的举办将对促进各领域间的交叉和融合，促进基础研究成果到临床的转化起到积极的促进作用。东胜创新， 拥有遍布全国的营销渠道和服务网络、职业化的专业技术服务团队 、规范快捷的物流支持系统，研发中心位于北京中关村生命科技园，香港东胜国际贸易有限公司作为东胜旗下专业的国际采购物流中心，与北京总部物流中心遥相呼应紧密合作，确保客户的需求能够得到快速响应和高效服务。销售热线：021-61374481客服邮箱：news@eastwin.com.cn官网www.eastwin.com.cn客服热线：800-810-8897 致力于生命科学最前沿技术        —东胜创新分子影像微信服务号：eastwin_mi

        我们知道以往的固定组织或固定细胞成像揭示了非常多的自然秘密，给了我们很大的启示，但现在的科学研究则希望在最真实的条件下观察细胞。纵观显微镜的发展历史，直到15年前，科学家主要还是处理死细胞。现在，活细胞研究的重要性已经越来越被意识到。                                    东胜创新（DeltaVision Elite活细胞成像系统）        加拿大McGill大学成像实验室主任Claire M. Brown表示：“要达到这个研究目的，我们非常需要一个不损坏细胞的封闭环境、且具有比较理想的成像条件。这一条件尤其对于进行动态、三维成像的多标记样品来说尤其重要。”让人高兴的是，近年来在光学设计、高灵敏检测器、优选探针和先进软件方面的改善，使得这一切成为可能。今天的活细胞工作站，不仅仅限于观察，目前的趋势已经从结构或细胞器的分析，转向了功能的相互影响观察研究。现在，科学家可以便利的购买到活组织应用的整合新设备，而不用将系统简单的拼凑在一起。如GE公司的活细胞工作站DeltaVision Elite提供适用于活细胞成像的高分辨率、高灵敏度、全自动化设备。通过对活细胞进行实时、长时间的成像，观察细胞内的动态变化过程，如细胞的有丝分裂、钙火花传导、细胞运动和迁移等。同时，搭载全内发射荧光模块（TIRF）对分子和膜运输之间的囊泡转运、相互作用成像尤其有用；搭载单分子成像技术，如PALM，STORM等，可实现超高分辨率成像，分辨率可达20nm。在照明波动中，DeltaVision Elite通过TruLight均一照明光学系统，控制光照的强度和均一性。计算机对这些变量的完全控制，确保了精确的、可重复的成像效果。        DeltaVision Elite通过专利的InsightSSI光源，大幅度的降低光毒性和光损伤，实现对活细胞长达500小时的连续成像；同时，专利的还原型迭代去卷积技术保证高分辨率、高灵敏度的图像获取。这一系列的专利设计在保证高质量图像的同时，实现了对活细胞的长时间连续成像，“鱼”与“熊掌”兼而得之。                        正在分裂的Hela细胞，其中绿色标记微管蛋白，红色标记染色体。        另外，专利的UltimateFocus自动对焦系统通过远红外激光实时监测盖玻片和物镜镜头之间的距离，保持成像焦平面的稳定，防止长时间time-lapse成像过程中跑焦现象的发生。活细胞培养环境控制系统能够实时控制细胞培养的温度、湿度和CO2浓度，以及整个成像系统的温度稳定性，保证成像的精确和可重复性。功能强大的SoftWoRx图像处理软件能够实现XYZ-λ（波长）-T（时间）-P（位置）六维活细胞成像、Time-Lapse成像、去卷积、三维重建、视频电影制作、多点观察、细胞跟踪、共定位分析、FRET/FRAP/TIRF成像、荧光强度定量分析等。        目前，活细胞成像方面的进展仍然在不断涌现。快速的、不断改善的动态分析方法，将对活细胞内部的功能蛋白质进行更好的研究。成像专家也在进一步推动原位成像的真实性。人们不仅想去观察一个动物体中的一个细胞，并且用显微镜进行成像，而且也期望看到全貌。你将会看到越来越多的整体动物的成像。对活细胞成像来说，能同时进行多通道成像，并且区别多重荧光信号将变得越来越重要。致力于生命科学最前沿技术—东胜创新分子影像微信服务号：eastwin_mi欢迎您和我们一起见证生命科学的成长

中国第一台质谱流式细胞仪震撼亮相厦门大学         2014年3月18日，这是一个值得纪念的日子，厦门大学校园内春意盎然，绿草如茵，年轻的学子们欢快的奔跑着，此时厦门大学细胞应激生物学国家重点实验室也在发生着一件令各位教授兴奋的事情---中国首台CyTOF 2质谱流式细胞仪正式安装调试中。来自美国DVS Science公司工程师Foroz Alam、北京东胜创新生物科技有限公司分子影像部CyTOF工程师陈晓安、陈新蕾亲临现场指导安装。 厦门大学细胞应激生物学国家重点实验室                 中国第一台CyTOF 2质谱流式细胞仪 美国DVS Science公司工程师Foroz Alam（中）北京东胜创新生物科技有限公司分子影像部CyTOF工程师陈晓安（右）、陈新蕾（左）                        两国工程师技术交流中          质谱流式细胞技术目前在国内可以说是一项领先技术，由北京东胜创新率先由美国引进且目前唯一拥有，此项技术利用质谱原理对单细胞进行多参数检测的流式技术。它继承了传统流式细胞仪的高速分析的特点，又具有质谱检测的高分辨能力，是流式细胞技术一个新的发展方向。       传统的流式技术主要基于对荧光发射光谱的检测，但是荧光基团发射光谱一般比较宽，其间往往会发生重叠。一方面限制了检测通道的数量（  和传统荧光流式检测的荧光发射信号相比，质谱流式细胞仪的信号有了质的飞跃。           为了解决这些问题，质谱流式技术应运而生。与传统流式细胞技术相比，其主要有两点改进：第一、标签系统的不同，前者主要使用各种荧光基团作为抗体的标签，后者则使用各种金属元素作为标签；第二、检测系统的不同，前者使用激光器和光电倍增管作为检测手段，而后者使用ICP质谱技术作为检测手段。通过这些改进，质谱流式技术巧妙的实现了更多参数的检测。         用金属标签抗体标记的细胞进入质谱流式细胞仪后，依次通过ICP质谱检测装置，然后对每个细胞中各种金属标签进行定量检测，从而得到每个细胞中各目标蛋白的含量。  技术特点：       由于利用ICP质谱作为检测手段，与传统流式细胞技术相比，质谱流式细胞技术具有以下特点：第一、通道数量增加到上百个       质谱流式细胞仪中的ICP质谱装置具有非常宽的原子量检测范围（88～210Da），因此可以对单个细胞同时检测上百个不同的参数。第二、通道间无干扰，无需计算补偿       ICP质谱具有超高的分辨能力，可以完全区分用来标记的各种元素。实验数据表明，相邻通道间的干扰第三、金属标签数量多，并具有极低的背景       用来作为标签的金属元素在细胞中的含量极低，而金属标签与细胞组分的非特异性结合能力极低，所以信号的背景极低。目前用来标记抗体的金属标签有30多种，随着技术进步，更多元素可以用来作为标签，种类会进一步增加。 第四、多样化的数据处理方式，实现对样品的深入分析。       质谱流式细胞仪通道数量的激增带来信息量的成倍增长。传统的流式分析方法已经不能完全满足需要，所以需要对数据进行各种降维处理，提取出其中包含的有用的生物学信息。常用的分析方法有：SPADE、PCA、viSNE以及Gemstone等。 应用领域：        质谱流式细胞技术可以实现对细胞群体进行精准的免疫分型，对细胞内信号传导网络进行全面的分析，分析细胞亚群之间的功能联系，以及对于大量样品的高通量多参数检测。在造血、免疫、干细胞、癌症以及药物筛选等多个领域的研究有着广泛的应用前景。      通过对13个核心表面抗原和18个辅助抗原表达情况的分析，对人骨髓细胞群进行高精度的分型，全景展示了骨髓各系不同分化阶段细胞的具体组成。 发展现状：        这项技术发展很快，商品化的仪器已经发展到第二代（CyTOF2）了。其生产商是美国一家 叫DVS Sciences的公司，2014年2月被Fluidigm并购。随着新资金的注入，北京东胜创新生物科技有限公司分子影像部率先引进中国并目前唯一拥有代理授权，利用公司遍布全国的营销渠道和服务网络、专业的技术服务团队为此项技术努力的推广中，为生命科学领域带来新的技术与希望，后期这项技术与产品服务将会为大家带来更多的福利。  CyTOF2质谱流式细胞仪    

     2013年“第四届中华医学细胞生物学学术大会”于2013年9月12-15日在东北重镇和美丽的鸭绿江之畔——沈阳/丹东举行。本次大会是由中华医学会主办，中国医科大学和中华医学会细胞生物学分会承办；我公司作为主要赞助商全程参与大会，并在会上为广大医学用户展示了我公司自主知识产权的第二代东胜龙基因扩增仪ETC811；     大会上，我公司的合作伙伴DVS还为参会者介绍了一项新型细胞分析方法-即用同位素标记抗体，结合质谱分析的方法实现了同时对细胞表面多达一百种标记物的检测。该项技术可以称为大量细胞计数法的方法，观察人类骨髓产生的不同形态细胞中及表面的34种物质，不但能正确归类10多种不同类型的免疫细胞，还能观察到各类免疫细胞的内部变化，从而预知可能发生的变化。这将有助于更快更广泛的测量处方药对人体细胞的反应及功效，提前发现细胞病变，研发出针对个人的治疗药物。做为本次会议的赞助厂商，我公司获得了与会者的广泛认可。

　　东胜创新生物科技有限公司自成立以来，坚持以品质为基础、以服务为宗旨、以强大的人力资源为后盾的发展理念，获得了市场的广泛好评。在与广大用户的交流中，我们技术服务队伍的业务水平不断提高，积累了丰富的实践经验。我公司已在全国范围内建立了覆盖全国的技术服务网点，为广大用户提供最优质最可靠的技术支持。 　　客户服务部下设客服事务部和客服技术部。客服技术部主要负责产品应用、方法的建立和推广以及疑难问题研究。并可以为用户提供完备的技术培训和服务。 　　客服事务部由多名从业多年的专业维修工程师领衔，由3个维修中心(北京、上海、广州、)和8个维修联络站(沈阳、西安、南京、厦门、济南、天津、长沙、杭州)组成， 负责提供及时的维修服务。目前客服人员的总数已经达到27人。对于仪器的维修需求， 均在24小时内响应并完成工作安排，普遍受到客户的赞誉。 　　为了进一步拓展业务。东胜创新生物科技有限公司客户服务部特诚邀全国仪器设备生产厂家，各品牌设备代理商合作 　　我部特推出服务和维修外包业务。可提供的服务项目有: 　　1 设备安装培训服务 　　2 设备维修保修服务 　　3 设备定期维护校准业务 　　4 厂家特约维修中心 　　具体合作方案细节请与我司联系 　　合作洽谈电话：13910289532 010 　　联系人：秦经理

十年来，东胜人用满腔热血投身于中国生命科学领域，从代理国际顶尖生物仪器品牌，为中国生物科学家奉上多元，优质的先进仪器设备，到披荆斩棘，潜心研发适合中国本土环境的PCR仪，走过了一条虽艰辛却生生不息的民族梦想之路！     东胜龙二代触摸屏PCR仪经过严格苛刻条件测试，终于惊艳上市了！它将与怀有民族梦想的科学家共同书写非凡传奇！ 从现在起，东胜创新发起为自主品牌触摸屏PCR仪有奖征名活动。您可发挥无限想像力，为他起个更响亮的名字。 活动细节如下： 1. 征名阶段（2012.09.10-2012.10.20） 活动举办地：全国 请务必填写如下各项信息，以及时与您沟通和联系，回复邮件至，Info@eastwin.com.cn 仪器命名： 姓名： 学校： 导师名称： 实验室地址： 联系电话：  2. 活动评选（2012.10.21-2012.10.25） 收集征名，根据票数多少进行排序，选出人气指数前5名的名称，参与终极一、二等奖的抽取，所有参加活动者参与三等奖评选。 备注：所有奖项不重复参与 3. 抽奖（2012.10.26-2012.10.31） 1等奖 1名，奖品为16G ipad 二等奖4名，奖品为500G移动硬盘 三等奖30名，奖品为8G U盘 4. 结果公布，发放奖品（2012.11.01-2012.11.05）    结果公布请见官方网站，同时中奖者以邮件和电话通知，对积极参与者表示感谢！    咨询电话：010-51660023-8001

　　Carestream多模式活体成像重要声明 　　2010年7月， Carestream起诉Caliper(原Xenogen)活体成像产品直接侵犯了我公司的成像专利(美国专利号7,734,325);在2010年2月，Caliper的全资子公司Xenogen，以及Stanford大学起诉Carestream在其成像系统的营销和销售中，间接涉及由斯坦福大学独家授权给Xenogen的成像专利。为了调停诉讼，双方于2011年8月达成和解协议。但是近期，个别代理机构利用Caliper Life Sciences, Inc. 和我公司双方专利诉讼调停的报道，来故意误导中国境内的客户，造成了严重的不良影响，Carestream中国区在此澄清和声明： 　　1 利兰-斯坦福青年大学托管委员会于1995年向中国国家知识产权局所申请的专利均为研究方法学专利，非仪器和功能专利(专利号：95198006.8)。 　　2 Carestream多模式小动物活体成像仪，具备发光，荧光，x-ray，同位素检测等功能，目前为止，已经为中国和世界其它各地的广大科研工作者提供了性能优异，质量可靠的活体成像的研究工具。 　　3 根据中华人民共和国专利法第六十九条第四款规定，为科学研究和实验等用途而使用专利的，不视为专利侵权，可无偿使用;此规定为包括美国、欧洲、日本等国家在内的国际通行准则。 　　4 我公司对任何错误解读翻译和误导该事件的商业行为所造成的不良影响和后果，将保留通过法律途经追究相关责任的权利，以维护我公司的合法权益;同时，本着对客户负责任的态度，我公司郑重对客户承诺，在Carestream多模式小动物活体成像仪器使用中，如有涉及专利方面的事宜，请直接与我们联系，我公司将会认真处理，避免给客户带来任何损失。 　　如有任何疑问请致电我公司 　　电话： 021-3852 6888 　　Carestream 　　Molecular Imaging

　　   　　今年最流行什么? 　　——团购! 　　维修也能团购吗? 　　——当然! 　　就在今夏，东胜创新正式吹响Sunrise酶标仪“团修”集结号! 　　——让您辛劳的仪器清凉过暑期! 　　您知道检修一次Sunrise需要花多少钱吗? 　　   　　我们能为您做的? 　　——提供维修并且享受全面维护! 　　——享有长达6个月的保修! 　　物流安全吗? 　　——东胜客服一律通过联邦或者顺丰快递为您递送仪器，并为仪器提供保险! 　　服务理念： 　　1、更放心：东胜创新是Tecan在中国大陆及香港地区总代理商。维修团体成员均接受过Tecan厂家提供的专业培训并获得资格证书，并且具有极为丰富的维修经验。 　　2、更专业：公司拥有Tecan Sunrise酶标仪专业检测工具，提供Tecan生产厂商标准检测，出具标准检测 报告。 　　3、更实惠：高标准、低价格。 　　如何参与? 　　全国免费电话：800 810 8897 　　手机用户可致电：400 818 2168，(010)51668935或(010)62965742 　　Email：weixiu@eastwin.com.cn 　　活动介绍： 　　Tecan Sunrise酶标仪凭借优异的性能在国内拥有众多的用户，仪器保有量较大。然而目前国内市场售后服务水平参差不齐，仪器维修质量得不到保证，维修费用却居高不下。 　　针对这一情况，东胜创新客服部集中力量组织了一支Sunrise酶标仪专业维修团队，并发起此次“团修”活动，力争为广大Sunrise酶标仪用户带来更高标准的服务以及更低的维修费用。 　　活动细则说明： 　　1、活动期限：2011年6月1日至2011年8月1日期间，以报名时间为准。 　　2、本活动仅限于TECAN公司生产的Sunrise系列酶标仪参与。 　　3、在您报名参与以后，我们会对您的仪器信息进行初步审核，并会通过邮件或传真形式为您寄发邀请函。 　　4、我们会通过邮件或者传真的方式为您寄送仪器信息登记表，请您如实填写表格中关于仪器信息的部分，并连同仪器寄送回东胜创新客服总部。 　　5、对于符合参与条件的用户，我们会随机奉上精美礼品。此礼品数量有限，对于款式或规格等疑问，恕不更换，还请谅解! 　　物流运输说明： 　　A 东胜负责仪器返还的费用及运输风险(客户验收必须按照东胜提供的流程验收，详见说明，否则客户承担风险)。 　　B 客户负责仪器送修的费用及运输风险，如果发生运输意外，东胜可以协助客户进行索赔。 　　C 仪器运输签单验收流程： 　　a、检查外包装是否有破损，如果有明显破损或者东胜封条破损，请拒绝签收。 　　b、包装有破损请及时拍照留存，以便索赔。 　　c、签收时，请核对运单信息。 　　温馨提示 　　您可以选择信誉比较好的物流公司(例如：顺丰快递，联邦快递) 　　相关声明： 　　为确保双方的权利和义务，特此声明如下： 　　1) 我们会在仪器维修完成后，为您提供正规的服务业发票，提供完整的QC报告。 　　2) 自接受到您寄送的仪器开始一周之内，我们会对您的仪器进行检修，作出相应的处理结果。 　　3) 我们会和您签订维修合同，在我们完成维修、维护工作后会通知您付款，在收到汇款后我们会将您的仪器连同发票一同寄送给您。 　　4) 保修期是在您接收到仪器并完成验收之后开始计算。 　　5) Sunrise酶标仪光纤和触摸屏的更换维修不在此次活动的范围之内，请谅解! 活动详情来电咨询800 810 8897 　　东胜创新客服部的进步离不开您的支持和建议! 　　东胜创新客服部享有对本次活动的最终解释权