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人血浆中头孢丙烯顺式和反式异构体的同时检测
2015/11/20 11:19
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方案摘要：
产品配置单：
科捷仪器LC600C 梯度液相色谱仪
型号： KJ LC600C
产地： 江苏
品牌： 南京科捷
¥10万 - 20万
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方案详情：
头孢丙烯为第二代头孢菌素类抗生素，具有广谱抗菌作用。临床用于治疗敏感菌所致的轻、中度感染。头孢丙烯中顺式异构体的含量在90%以上，而反式异构体只占10%以下。顺反式异构体在化学稳定性和抗革兰阳性链球菌和葡萄球菌活性方面是相同的，但在抗革兰阴性大肠埃希杆菌、肺炎克雷伯菌等方面，顺式的抗菌活性是反式的6～8倍。
可采用高效液相色谱同时测定人血浆中顺式（Z）和反式（E）异构体浓度。
检测所需仪器
高效液相色谱仪，配有工作站； 旋涡混合器； 高速台式离心机。
色谱条件
色谱柱：（200×4.6 mm，5μm）；流动相：0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液（磷酸调pH值2.50）-乙腈（88：12）；检测波长：280nm；柱温：30 ℃；流速：1.2 ml/min；进样量：50μl。
测定方法
1 精密量取血浆样品500μl，加入内标（100.2μg/ml头孢拉定）50μl，20%三氯醋酸100μl，漩涡混合1分钟，离心6分钟，取上层液，依次加入乙腈0.5ml和二氯甲烷2ml，振荡6分钟，离心6分钟，取上层液离心6分钟，取50μl上清液进样分析。
2 精密量取空白血浆500μl，分别加入顺式（Z）和反式（E）异构体标准系列溶液各50μl，配制成血浆中顺式（Z）异构体浓度为0.1003，0.3008，1.0025，2.0050，4.0100，8.0200，16.0400μg/ml和反式（E）异构体浓度为20.0，40.1，100.2，200.4，400.8，1002.0，1603.2ng/ml的血浆样品，按“血浆样品处理”项下自“加入内标溶液”起同法试验，以待测物浓度为横坐标X，待测物与内标物的峰面积比值（AS/Ai）为纵坐标Y，用加权最小二乘法[2]（权重系数：1/X2）进行线性回归运算，求得的线性回归方程即为标准曲线方程。
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