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应用分享 | CytScop®Pro智能细胞计数仪的混匀效果评价

浚真生命科学

2024/09/11 08:58

阅读：4

众所周知，高通量的细胞计数仪在测试的过程中，待测样本会有不同程度的沉降，如果样本在上样前未被充分混匀，测量结果的准确度和精确度将无法保证。CytScop®Pro设有上样前自动混匀装置，可以保证待测样本在上样前充分混匀。

为了确定CytScop®Pro智能细胞计数仪在上样前混匀是否对样本造成影响，我们使用CHO细胞样本，在0-2h的静置时间下，使用CytScop®Pro进行测试，分析仪器的混匀效果以及对样本的影响。

图1 CytScop®Pro智能细胞计数仪

一、测试样本及仪器设置参数

细胞样本

CHO细胞，浓度7.5×106 cells /mL，活率90%左右

测试模式

TB染色

细胞样本仪器测试参数

二、实验方案设计及取样

将准备好的样品一次性取出，共计60个样本。从取完最后一个样品开始计时，对样品分别静置0h、0.5h、1h、1.5h、2h，随机抽取4台CytScop®Pro进行上机检测，每台仪器每组静置时间从取出的样品中随机抽取3个平行样本进行上机，保证取样的随机性，减小取样误差。对于静置0h的样本在上机前手动吹匀。

三、计数结果分析

随机取样，可以有效减小取样误差，从而对整个测量过程减少非系统性误差。变异系数（C.V）是用来衡量各观测值变异程度的一个统计量，在仪器的测量中可以用来反映仪器测量的精确性。如下图2和图3所示，是4台CytScop®Pro测量总细胞浓度（TCD）和活细胞浓度（VCD）的C.V值。

图2 在不同静置时间下测量样品TCD的C.V值

图3 在不同静置时间下测量样品VCD的C.V值

对4台仪器在不同静置时间下测量TCD和VCD进行统计分析，如图4和图5所示。

图4 在不同静置时间下4台仪器测量TCD

图5 在不同静置时间下4台仪器测量VCD

对4台仪器在不同静置时间下，测量样品直径（Dia）和活率（Via）的变化，如图6和图7所示。统计测量TCD、VCD和Via在0h-2h的变化，差异统计图表1所示。

图6 在不同静置时间下4台仪器测量Dia

图7 在不同静置时间下4台仪器测量Via的变化

表1 样品静置0h和2h测量结果差异

四、结论

随机抽取的4台CytScop®Pro仪器，通过对静置0h-2h的样品上机测量，对TCD和VCD通过C.V分析（如图2和图3），4台仪器均表现出来非常好的测量重复性，C.V均在3%以内，说明仪器精确度较高，系统误差小。

相对于同一台仪器而言，对于静置0h-2h的样本进行测量，发现TCD和VCD的测量结果均没有显著性差异（p>0.05），与静置0h相比，静置2h后，测量浓度变化小于3%（如表1所示）。不同的仪器（如图4和图5所示），对相同静置时间下样本浓度的测量没有显著性差异，说明仪器间差异很小。

对测量直径进行统计分析，如图6所示，可以看到对于同一台机器来说，在不同的静置时间下，样本直径变化非常小，不超过3%，没有显著性差异（p>0.05）；而对在相同静置时间下的样本，不同仪器的测试结果也没有显著性差异。对4台仪器在各静置时间下Via测试结果对比分析（如图7所示），可以看到随着样品静置时间的加长，Via出现轻微降低的趋势。与静置0h相比，静置2h后，Via平均下降4.5%左右。活率下降与常温放置时间有关，放置时间越长，活率下降越大；另外，样本初始活率较低（90%左右），细胞状态比较一般，所以样品活率在同一台仪器中的测量下降比较显著。

综上，CytScop®Pro智能细胞计数仪对于静置0h-2h的样本测量具有较好的混匀效果，测量的细胞浓度在时间梯度上没有显著性差异，且对细胞本身的活率影响较小，体现了CytScop®Pro对高通量样本测量具有良好的稳定性。

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