众所周知,高通量的细胞计数仪在测试的过程中,待测样本会有不同程度的沉降,如果样本在上样前未被充分混匀,测量结果的准确度和精确度将无法保证。CytScop®Pro设有上样前自动混匀装置,可以保证待测样本在上样前充分混匀。
为了确定CytScop®Pro智能细胞计数仪在上样前混匀是否对样本造成影响,我们使用CHO细胞样本,在0-2h的静置时间下,使用CytScop®Pro进行测试,分析仪器的混匀效果以及对样本的影响。
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图1 CytScop®Pro智能细胞计数仪
CHO细胞,浓度7.5×106 cells /mL,活率90%左右![图片](https://img1.17img.cn/17img/images/202409/uepic/2750f10f-af91-4d5c-9468-6aa7bfacd3df.jpg)
将准备好的样品一次性取出,共计60个样本。从取完最后一个样品开始计时,对样品分别静置0h、0.5h、1h、1.5h、2h,随机抽取4台CytScop®Pro进行上机检测,每台仪器每组静置时间从取出的样品中随机抽取3个平行样本进行上机,保证取样的随机性,减小取样误差。对于静置0h的样本在上机前手动吹匀。
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随机取样,可以有效减小取样误差,从而对整个测量过程减少非系统性误差。变异系数(C.V)是用来衡量各观测值变异程度的一个统计量,在仪器的测量中可以用来反映仪器测量的精确性。如下图2和图3所示,是4台CytScop®Pro测量总细胞浓度(TCD)和活细胞浓度(VCD)的C.V值。![图片](https://img1.17img.cn/17img/images/202409/uepic/1d39418a-ec7d-4fd1-8acb-3f3d74185740.jpg)
图2 在不同静置时间下测量样品TCD的C.V值
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图3 在不同静置时间下测量样品VCD的C.V值
对4台仪器在不同静置时间下测量TCD和VCD进行统计分析,如图4和图5所示。
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图4 在不同静置时间下4台仪器测量TCD
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图5 在不同静置时间下4台仪器测量VCD
对4台仪器在不同静置时间下,测量样品直径(Dia)和活率(Via)的变化,如图6和图7所示。统计测量TCD、VCD和Via在0h-2h的变化,差异统计图表1所示。
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图6 在不同静置时间下4台仪器测量Dia
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图7 在不同静置时间下4台仪器测量Via的变化
表1 样品静置0h和2h测量结果差异
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随机抽取的4台CytScop®Pro仪器,通过对静置0h-2h的样品上机测量,对TCD和VCD通过C.V分析(如图2和图3),4台仪器均表现出来非常好的测量重复性,C.V均在3%以内,说明仪器精确度较高,系统误差小。相对于同一台仪器而言,对于静置0h-2h的样本进行测量,发现TCD和VCD的测量结果均没有显著性差异(p>0.05),与静置0h相比,静置2h后,测量浓度变化小于3%(如表1所示)。不同的仪器(如图4和图5所示),对相同静置时间下样本浓度的测量没有显著性差异,说明仪器间差异很小。对测量直径进行统计分析,如图6所示,可以看到对于同一台机器来说,在不同的静置时间下,样本直径变化非常小,不超过3%,没有显著性差异(p>0.05);而对在相同静置时间下的样本,不同仪器的测试结果也没有显著性差异。对4台仪器在各静置时间下Via测试结果对比分析(如图7所示),可以看到随着样品静置时间的加长,Via出现轻微降低的趋势。与静置0h相比,静置2h后,Via平均下降4.5%左右。活率下降与常温放置时间有关,放置时间越长,活率下降越大;另外,样本初始活率较低(90%左右),细胞状态比较一般,所以样品活率在同一台仪器中的测量下降比较显著。综上,CytScop®Pro智能细胞计数仪对于静置0h-2h的样本测量具有较好的混匀效果,测量的细胞浓度在时间梯度上没有显著性差异,且对细胞本身的活率影响较小,体现了CytScop®Pro对高通量样本测量具有良好的稳定性。
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