人乳腺癌抗雌激素药物耐药性基因1(BCAR1)elisa试剂盒

人乳腺癌抗雌激素药物耐药性基因1(BCAR1)elisa试剂盒

实验目的：

本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人乳腺癌抗雌激素药物耐药性基因1(BCAR1)的含量

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定大鼠标本中人乳腺癌抗雌激素药物耐药性基因1(BCAR1)水平。用纯化的人乳腺癌抗雌激素药物耐药性基因1(BCAR1)捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入人乳腺癌抗雌激素药物耐药性基因1(BCAR1)，再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人乳腺癌抗雌激素药物耐药性基因1(BCAR1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人乳腺癌抗雌激素药物耐药性基因1(BCAR1)含量。

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试验所需自备物品:

1.  酶标仪(450nm波长滤光片)

2.  37℃恒温箱，双蒸水或去离子水

3.  自动洗板机

4.  高精度移液器， EP管及一次性吸头： 0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL

5. 吸水纸

检测程序:

1. 加样：空白孔加入50μl标准品/样品稀释液，其余孔各加入标准品或待测样品50ul，将反应板混匀后置37℃，40分钟。

2. 洗板：用1×洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，每孔加入1×洗液350μl，每次震荡/浸泡1-2分钟，向滤纸上印干。

3. 空白孔加入100ul生物素化抗体稀释液，其余孔各加入1×的生物素化抗体工作液100ul，混匀后置37℃，30分钟。

4. 洗板：同上。

5. 每孔加入SABC复合物工作液100ul，混匀后置37℃，20分钟。

6. 洗板：同上。

7. 每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul，混匀后置37 ℃暗处反应10-20分钟（具体显色时间根据显色结果而定）。

8. 每孔加入100ul终止液，混匀，30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果判断与计算：

1. 所有OD值建议减除空白值后再行计算，如空白OD低于0.1，也可以直接计算。

2. 以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD值计算出相应含量，再乘上稀释倍数即可。

试剂盒性能:

1、 检测范围:0.625-40ng/mL

2、 特异性:同时可检测重组或天然的某种蛋白或抗体，不与其它细胞因子有交叉反应。

3、 重复性:板内，板间变异系数均小于10%。

操作步骤:  

1.加样→2.温育→3.配液→4.洗涤→5.加酶→6.温育→7.洗涤→8.显色→9.加终止→10.测定。

1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，每个标准品和空白孔建议做复孔，每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。

3． 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体，盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次，如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5． 每孔加入50ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次，如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7． 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8． 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9． 在450nm波长处测定各孔的OD值。

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