Tte AP 热稳定核酸酶
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1357-1000U | 1000U | Tte AP 热稳定核酸酶 |
P-PR1357-5KU | 5KU | Tte AP 热稳定核酸酶 |
产品介绍:
描述:
ThermoStable dsAP Nuclease (耐热双链特异性AP 核酸内切酶) 来源于嗜热菌,是一种热稳定的特异性识别双链脱嘌呤/脱嘧啶(AP)位点的核酸内切酶。该酶可
切割 AP 位点 5’端的第一个磷酸二酯键,产生 3′羟基和 5′脱氧核糖磷酸末端(deoxyribose phosphate, dRP)。
该酶作用底物为双链 DNA(含 AP 位点),对单链DNA(含 AP 位点)、ssDNA、dsDNA 无活性。该酶的最佳活性温度为 60-70°C,在 85°C 以上温度逐步失活。
单位定义:
一单位指,在 10μl 反应体系中,60°C 反应 15min,切割1 pmol 含一个 AP 位点的寡核苷酸双链,所需要的酶量。
1×dsAP Buffer:10mM Tris-HCl,pH7.8; 50mM KCl;0.1% Tween20;0.02% BSA, 5mM Mg2+。
酶储存液:20 mM Tris-HCl, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% Glycerol, pH 7.8。
操作方法:
含 AP 位点的 DNA 2-20pmol
10xdsAP Buffer 2 μl
ThermoStable dsAP Nuclease 1 μl
ddH2O Up to 20 μl
60°C 反应 15-30min
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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