产品名称:脂肪组织蛋白提取试剂盒(蛋白组实验、质谱适用)-滤除固体杂质
产品规格:50T
蛋白提取试剂盒(蛋白质组学实验适用)适用于从各种原代或传代动物细胞和各种实体组织,如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取总蛋白。提取过程简单方便,可在1小时内完成。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份,包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒的蛋白提取组份中不含有不可透析除去的去垢剂组份,不含SDS、Triton X-100、chaps等可能影响质谱实验的组份,最后得到的蛋白质样品经过透析或者脱盐处理后将不含有去垢剂、高浓度盐等影响,基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关实验研究。 本产品的蛋白酶抑制剂混合物中不含AEBSF,可以避免由于AEBSF导致的质谱峰漂移,因此使用本产品提取的蛋白样品可以用于质谱(Mass Spectrometry, MS)检测和分析,蛋白质组学(proteomics)等相关研究。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
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脂肪组织蛋白提取试剂盒(蛋白组实验、质谱适用)-滤除固体杂质使用方法
1. 提取液制备:
将试剂A1和试剂A2混合,配成蛋白提取液A,充分混匀备用。
每500 μl蛋白提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用
2. 取5-10×106个以上细胞,在4℃,500×g条件下离心3-5分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 细胞样品中加入200μl-400μl冷的试剂 A,充分混匀。
5. 在2-8℃条件下振荡20-30分钟,至细胞充分裂解,细胞沉淀明显减少。
6. 在4℃,12000×g条件下离心5分钟。
7. 将上清吸入另一干净离心管,在37℃水浴5-10分钟。
8. 在37℃,1000×g力离心5分钟,此时溶液分为两层,下层是膜蛋白约为30-50μl。
9. 小心移除上层液体,收集上层部分留作备用分析。
10. 用150-200μl冰冷的试剂B充分溶解下层膜蛋白部分,混匀后冰浴2分钟,37℃水浴5-10分钟,37℃,1000×g力离心5分钟,此时溶液分为两层,下层是膜蛋白约为30-50μl。小心移除上层液体,保留下层。
11. 按以上步骤再次抽提下层膜蛋白(此步骤可以选做,一般不需要做)。
12. 用50-200μl冷的试剂C膜蛋白溶解液溶解下层膜蛋白部分,即得膜蛋白。
13. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
使用注意事项:
1旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
4 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
5 如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
6 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
7下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测,提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂,注意提取过程保持低温操作,缩短离心时间。
脂肪组织蛋白提取试剂盒(蛋白组实验、质谱适用)-滤除固体杂质,注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完!
保存温度2-8℃
保质期1年
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