SCIEX LC-MS/MS 在药典生物药中的应用方案

1. 蛋白分子量测定

完整蛋白分子量测定是生物药表征和质量控制的重要指标。SCIEX QTOF 系统动态范围宽，单次扫描可同时检测高丰度和低丰度的变异体分子量。此外，还可达到蛋白亚基同位素分辨的效果（结果与理论模型匹配率非常高），在鉴定蛋白翻译后修饰方面准确度更高。BioPharmaView™ 软件和BPV Flex软件数据处理功能强大，操作简便，数据展示直观，可针对不同的蛋白分子，优化数据处理参数，帮助获得最佳的实验结果。

2. 肽图表征

使用SCIEX QTOF 系统结合SWATH® 采集技术（数据非依赖性采集模式）的解决方案，能够获得几乎全覆盖的曲妥珠单抗肽图信息，提供高分辨率的碎片离子XIC 图可降低其他肽段的干扰， 同时能够对低丰度的肽段修饰进行可靠的鉴定和确证。这种非常低丰度肽段修饰的鉴定能力对于提高可信肽段覆盖度和鉴定生物分子的潜在重要质控指标提供了很大的帮助。

3. 二硫键分析

SCIEX QTOF 系统拥有非常快的扫描速度，能快速获得准确的和高质量的一级和二级肽图信息。通过将还原和非还原的肽图数据进行比对，即可锁定含二硫键的肽段。BioPharmaView™ 软件和BPV Flex软件能自动对多肽二级谱图中的b, y离子进行归属，然后将观测到的二级谱图碎片离子与理论进行匹配，确认非还原肽图中含二硫键的肽图。使用二级谱图的得分、电荷态以及保留时间等限制条件能进一步提高数据的分析速度和分析结果的准确度。

4. 糖基化分析

蛋白糖基化分为N 糖基化和O 糖基化，其中N糖基化具有成熟的分析方案，通常采用单一内切酶（PNGF）将N 糖基化糖型从蛋白上酶切释放并采用2AB 等试剂标记，从而进行LC-MS/MS 糖型表征和定量分析。由于不存在单一酶能将O 型糖基化糖型进行酶切释放，O 糖基化糖型的表征一直是业内难点。因而，基于SCIEX QTOF 系统，我们开发了一种快速、综合的分析方法对重组蛋白人源C1 酶抑制剂中的O 糖基化糖型进行表征分析，单针进样共鉴定到样本中四种不同的O 糖基化糖型。该方法省事、快速，同时也适用于其他具有挑战性的蛋白O 糖基化糖型的分析。

5. 宿主细胞残留蛋白HCP 检测

目前选择合适的分析策略用以检测宿主细胞蛋白污染水平非常困难。一条路线是以ELIAS 方法为主，该方法灵敏度高、检测速度快，但是存在检测盲点，实验结果往往偏差较大。另一条路线是质谱法，该方法检测结果无偏差，但分析通量低，重现性差（以蛋白组学应用为主）。SCIEX QTOF 系列质谱的SWATH® 采集技术是在非靶向采集的方法下，获得高灵敏度的、大量HCP 信息；SWATH® 采集技术既保证了采集方法的专属性、灵敏度，又保证了采集方法的高通量性；另一方面，SWATH® 采集技术和微升流速联用，大大缩短分析时间的同时，也可获得良好的稳定性。