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使用离心机进行外泌体（Exosome）分离纯化的标准方法
2023/03/14 15:47
阅读：158
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方案摘要：
产品配置单：
米立特MLT-V30R台式亚超速冷冻离心机
型号： MLT-V30R
产地： 江苏
品牌： 米立特
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方案详情：
目前外泌体研究是非常热门的课题，主要原因是外泌体在细胞内的信号传导中起到 了重要的作用, 故外泌体可以用于预诊断，治疗，及作为生物标记物。外泌体是细胞衍 生的膜泡，其由脂质双层形成，从细胞分泌出来，大小在20-200nm 之间，呈现于唾液， 血液，尿，羊水，等体液内。本文将介绍使用离心机进行分离纯化的标准方法：
1. 首先使用差分离心进行粗纯化，步骤如下：
1）. 收集细胞上清液或体液，在低离心力下进行离心 （300-500xg）, 离心约 10 分钟，除去细胞沉淀，将上清转到另一个离心管中
2）. 增加离心力，2000-5000xg, 离心 10 分钟，进一步除去细胞沉淀，收取上清 到新的离心管
3）. 增加离心力，在 10000xg 下将前面收集的上清进行离心，约 1 小时，收取沉 淀，则为粗纯化的外泌体
上述步骤可使用米立特高速冷冻离心机 及不同容量的转头进行离心
2. 密度梯度离心进行外泌体的进一步纯化： 将上述粗纯化的外泌体加入碘克沙醇（iodixanol）进行进一步纯化。步骤如下：
步骤 1：使用碘克沙醇进行密度梯度离心来纯化外泌体
步骤 2 分馏收集溶液并进行密度测试： 离心分离后, 每 2ml 溶液进行分布收集成 17 个样品管, 并对每管溶液进行屈光计检测. 根据每管溶液的屈光值进行密度计算.
步骤 3. 确定含有外泌体的收集管： 外泌体应该存在于密度在 115-119g/cm3 的收集管，所以大概可以确定收集管#12 和 13 是纯化的外泌体。
步骤 4 清洗外泌体并保存： 使用 PBS 清洗外泌体并保存在 4℃。
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