流式细胞仪的技术发展

    流式细胞仪与其他细胞剖析仪器比较，具有突出的技能特征，这些技能特征的不断改善就大致地代表了流式细胞仪的技能发展过程。

    1、高速度:

    剖析速度以每秒可剖析的细胞数来表明。流式细胞仪是以高速度的数据处理电子体系信号，合作GX的液流控制体系，有力地保证了流式细胞仪的检测功能。

    流式细胞仪对细胞的检测速度一般为1000——5000个/s;而到现在为止，对细胞的规范剖析速度已到达了2×104个/s，Zda剖析速度可到达6×104个/s。

    2、高灵敏度:

    灵敏度的高低是衡量流式细胞仪检测弱小荧光信号的重要目标，一般是以能检测到单个微球上Z少标记有异硫氢酸荧光素(FITC)或藻红蛋白(PE)荧光分子数目来表明。

    曾经，每个细胞要带有1000——3000个FITC分子才能在流式细胞仪上丈量出来;现在，一个细胞上只要带600个荧光分子，乃至带100个FITC分子，即可以被检测和分选出来。

    3、高准确度:

    曾经，在两个细胞间待测细胞成分存在5%以上的差异时，流式细胞仪才能检测出来;现在，两个待测细胞间细胞成分仅相差1%左右时，流式细胞仪便可检测出来。例如，在检测男人和女性外周血淋巴细胞DNA含量时，仅仅是X染色体和Y染色体DNA含量之间有所区别(大约相差约占整个细胞的2%左右)，使用流式细胞仪便可以轻而易举地把男人和女性的淋巴细胞区别隔并分选出来。

    4、高精度:

    分辨率是衡量流式细胞仪丈量精确度的目标，通常用变异系数(CV)值来表明。用流式细胞仪检测某种细胞成分时，比用其他剖析细胞学技能的CV值都要小得多，分辨率要高得多。众所周知，用某种仪器剖析细胞时，其CV值越大，剖析结果越不精确。

    曾经的流式细胞仪，在剖析细胞样品时，CV值只能到达5%——7%左右，前向角散射光分辨率仅为0.3μm。流式细胞仪前向角散射光的分辨率已到达0.02μm。流式细胞仪的电信号脉冲通道，从最初的128道→256道→1024道，直到现在一般已到达40%道，有的乃至还可以到达5120道。

    信号脉冲通道数散布越多，对细胞的分辨率就越高，对细胞的剖析就越精确。例如，现在，各流式细胞仪生产厂家生产的流式细胞仪，都能以高精确度来剖析人类染色体的畸变，经过二维图显现扩展集体散布，极大地进步了流式细胞仪的分辨率。别的，经过对脉冲体系功能的改善，也进步了细胞参数剖析的质量。

    5、多参数:

    流式细胞仪剖析细胞时，可以从一个细胞中一起获得多种细胞信息。因为流式细胞仪选用的光源不断改善从开端的单一的激光器或紫外光器，至现在发展为选用2-3个激光器，或再加一个紫外光器。

    有的选用立体空间激光体系，实现多荧光道剖析，Zda程度地削减荧光信号之间的补偿，进步检测的灵敏度，所以，利用空间立体激起的多激光体系可以进步多参数的剖析质量。

    现在的单激光四色剖析或双激光四色剖析的流式细胞仪，488nm激光器激宣布的4种不同荧光光谱之间常有堆叠，做4色剖析时，难以避免荧光过多堆叠而导致的补偿困难。利用该体系对488nm激光发生的3色荧光与635nm激起而发生的第4种荧光分成两种信号，能Zda程度地削减补偿，使4色荧光到达Zwan美的效果。

    因而在一个细胞中，除剖析前向角和侧向角的散射光参数外，还可以检测到3种、4种、6种，乃至到8种荧光参数，这明显增加了流式细胞仪的信息量，进步了工作效率和科学性。

    6、高纯度:

    流式细胞仪的重要功能之一是能分选出实验者所需要的任何细胞。其分选目标首要包含:分选速度、分选纯度和细胞回收率。这些目标均随流式细胞仪的技能发展而逐步得到改善和进步。

    现在流式细胞仪分选细胞速度已到达6×104——1×105个/s，分选纯度为99.9%以上，分选回收率也达90%以上。

    7、其他几方面的技能改善:

    ①荧光信号从线性丈量到对数丈量的改善，因为对数丈量可以放大电信号，使之对弱荧光和某些药物自发荧光标本检测才得到满意的结果;

    ②光谱堆叠的校对，经过补偿润饰软件的开发使用，从而保证了各种不同激起荧光检测剖析的质量;

    ③DNA含量剖析时，经过剖析脉冲的面积、宽度，区别实体瘤组织标本中的粘连细胞集体，剔除DNA检测中的二联体细胞，Zda程度地削减假阳性，从而处理了实体瘤DNA剖析时长期存在的关键性的难题;

    ④曩昔选用激光的一种波长(如488nm)的发射光仅能激起样品中一种波长的继发光，因而，只能检测细胞中一种细胞成分。现在流式细胞仪选用一种488nm激起波长的发射光，可以一起激起样品中三种或四种不同波长的继发光，这便可用于同一细胞不同成分的同步剖析。