为什么稀释内毒素标准品需要旋涡振荡？

《美国药典》中的细菌内毒素检查法中规定，应使用国家参考标准内毒素（RSE），复溶后应旋涡振荡不少于20min；复溶后的原液于冰箱保存不超过14d，再次使用前要强烈地旋涡振荡不少于5min；随后的每一步稀释前被稀释液也要旋涡振荡不少于1min；不能使用保存的稀释液。美国鲎试剂厂家供应的工作标准内毒素（CSE）在使用说明书中都对内毒素的复溶和稀释有使用旋涡混合器震荡的要求。同样，世界卫生组织及各国药典中的细菌内毒素检查法也对标准内毒素的稀释有震荡混合的要求。

为什么对标准内毒素的稀释有如此特殊的要求呢?这与内毒素的化学成分与结构有关。

LPS是具有疏水和亲水双重活性的两性分子；多糖链具有亲水性；脂肪链具有疏水性。内毒素溶于水或稀释时，LPS的亲水性糖链朝向水和水接触，而疏水性的脂质链部分却背向水，这样，LPS的疏水端自然聚集成团，形成直径约为0.1μm的双层壳状或泡囊。脂质A藏于聚集团的内部或贴附于器皿上，而脂质A是激活堂试剂的主要部分，在水溶液中，由于其疏水性而不能与鲎试剂充分接触，造成检测到的内毒素含量偏低。若是检测前利用旋涡装置充分振荡，可以使贴附于器皿上的内毒素分子脱落，使聚集团的相对分子质量下降。经振荡后的内毒素溶液重新静置一段时间后，内毒素仍然会聚集成团或贴附于器皿壁上，所以样品存放一段时间后，在使用前仍需充分振荡。

实验表明，同一批号的国家参考标准内毒素在稀释时震荡与否结果相差很大。若采用旋涡震荡法稀释内毒素，效价测定的结果与国际参考标准内毒素（IS）基本一致；若不经振荡稀释，则测定的效价要比国际参考标准内毒素低50%～75%。所以，内毒素在稀释时一定要充分振荡，才能得到所标示的效价。在实施1995年版的《中国药典》前，我国相当部分的鲎试剂在标定灵敏度时，没采用振荡稀释内毒素的方法，导致标定的灵敏度高于实际值100%~300%。也就是说，鲎试剂用户在使用比标示灵敏度高1～3倍的堂试剂做细菌内毒素检查。