细菌内毒素（脂多糖）提取法之三氯醋酸法及酚水法的介绍

内毒素系革兰氏阴性菌细胞壁外膜中的脂多糖（Lipopoly saccharide，LPS）成分。在维持外膜的结构、通透性以及临床阴性菌感染中均起着重要的作用。以化学方法提取的LPS注射动物能重复革兰氏阴性菌感染期间所出现的多种病理反应，故实验动物应用提取的LPS可更好地了解LPS的致病作用并寻找可能的防治对策。

一、三氯醋酸法（Trichloroacetic Acid，TCA）

TCA法是Boivin等（1933）首先应用的，借助0.25N TCA，在4℃可将LPS从湿菌或经丙酮干燥的细菌中提取出来，加入2倍体积的冷乙醇即可取得LPS的沉淀物。用这种方法提取的产物，严格地讲是一种LPS-蛋自质复合物，这种复合物即方早期所称的Boivin抗原。TCA法提取的LPS产量较高，具有很好的抗原性，对O特异性侧链抗体有血清学特异反应，可结合补体和致敏红细胞，分子量达几百万，但蛋白质含量很高，故纯度较差。目前这一方法已较少使用。

二、酚水法

这一方法是Westphal等于1952年提出的，该法是目前应用最广泛的方法。酚水法主要用于S型细菌LPS的提取，亦可用于R突变型细菌LPS的提取，但产量稍低。酚水法提取液所含的苯酚与水的比例是45 : 55。当提取液加热至68℃并维持5分钟时，苯酚和水形成了一个单一的相，冷却至4℃后，形成了两个相，分别为苯酚相（被水饱和）和水相（被苯酚饱和）。核酸、多糖及LPS大部分溶解于水相中，而大部分蛋白质溶解于苯酚相中，不溶性物质沉淀在两相交界处。

含LPS的水相经吸取、透析〈去除苯酚）并干燥后即为LPS的粗制品。LPS粗制品经超离心1000000×g，可得到精制的LPS。精制后的LPS，尚含有多糖成分及与其共价结合的类脂体A成分、小量的肽（1～3 %）。这种提取物对人、兔的抗原较弱，但能展示O特异性侧链抗原反应。内毒素毒性较强，致敏红细胞不明显，能结合补体，分子量有几百万。产量仅1~4 %（占干菌重）。