各国法定检测内毒素的方法

美国首先将LT法（鲎变形细胞溶解物试验）作为检测内毒素的法定方法。在美国药典第20版（1980）的细菌内每素一项中对LT法亦进行了详细的介绍。继美国以后，许多国家（特别是欧洲国家）纷纷仿效，亦已将LT法作为检测内毒素的法定方法。现以美国为例，来说明这种法定的LT法。

美国食品药品管理局（FDA）对厂家提出了一条准则。FDA认为对于应用于人类的药物、生物制剂、兽用药物及医疗器械必须将LT法作为法定的终产品（end product）内毒素检测方法，厂家只有遵循这个原则并按介绍的方法操作后，其产品才能得到FDA的承认。

LT法作为法定的内毒素检测方法，在进行测定时必需作①测定鲎试剂的敏感性；②抑制与增强试验。

1.鲎试剂的敏感性

在鲎试验的操作过程中，各个实验室之间必定有差异。检测人员必须应用同一批鲎试剂及同一批内毒素作4~8个稀释度的试验，以2倍倍比稀释以便取得适宜的终点范围作LT。终点内毒素量应以ng/ m1表示，然后换算成log值，计算标准差（SD）。如果4个稀释度的SD值小于或等于SD值的99%限值，则此方法是可用的。如SD超过比值，则应采用8个稀释度的试验，计算新的SD值。此时，如SD值仍超过8个稀释度SD的99%上限值，则此方法由于变异太大不能采用。在重新试验前应找出原因并进行纠正。

如实验室通过了上述变异试验，则应以一系列浓度的参考标准内毒素（RSE）或对照标准内毒素（CSE）检查鲎试剂的敏感性，如果鲎试剂的敏感性差异不超过标定值的2倍稀释，则认为是满意的。

2.抑制与增强试验

一种药物含不同浓度的标准内毒素（敏感性以鲎试剂标定》，然后与水中的一系列同种内毒素浓度进行比较。标准系列的内毒素检测结果与药物中的内毒素检测含量进行比较，其差异不应超过两倍稀释浓度。原则说明此种药物有抑制或增强现象。

由不同浓度不同活性要素组成，而其它成分相对恒定的药物，只需测最高和最低浓度即可，如果每种浓度均表明有抑制或增强，则每种浓度均需进行抑制/增强试验。

所有法定的药物检测均需在未稀释或在适当稀释后测定。稀释倍数不能超过最大有效稀释（Maxium Valid Dilution，MVD），否则其中的内毒素经稀释后浓度过低而不被LT法检出。

如果药物表明有抑制或增强现象，则应服从RT法。此时，RT法仍将是检测药物内毒素含量的适宜方法。至少应检测3个生产批次终产品的抑制及增强试验。如果药物的加工制造过程改变，或药物的配方或药物中某种特殊要素的来源改变，则每种药物至少要对3种单位重复测定抑制/增强试验。如鲎试剂的生产或鲎试剂批号更变时，至少每种药品要对1种单位进行重复测定。