8月8日至13日,清华大学蛋白质研究技术中心联合中国细胞生物学学会细胞器生物学分会主办第三届活细胞与超高分辨成像高级研讨会。
8月10日,清华大学欧光朔教授、清华大学吴嘉敏助理教授、清华大学王瑾瑜工程师、INVIEW 宁波力显智能科技有限公司研发总监王莹进行了精彩的讲座和演示。
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《单分子超高分辨率显微成像技术在生物医学领域的应用》——王莹
(1)iSTORM是否可以快速找到目标细胞?
答:可以先用宽场成像,对样品整体进行快速扫描,找到目标细胞后进行超高成像。
(2)iSTORM是怎么实现20nm的分辨率?
答:使用配置中的缓冲液和染料及照明光配合,可以使样品上标记的荧光染料“闪烁”,使得原始图像上可以获得单分子的荧光染料图像,之后通过单分子定位原理,对每个亮点进行位置拟合,并记录在超高成像结果中。单个荧光点的定位精度与拍摄中获得的荧光点光子数目有关系,一般情况下可以将分辨率提升10倍。
(3)使用iSTORM进行拍摄成像所需的时间是多久?
答:根据样品及结构的不同,成像时间也不同。结构比较复杂的固定细胞可能要几分钟到十几分钟,活细胞成像最快可以几秒钟完成。
(4)iSTORM如何保证锁定稳定性?
答:使用物理锁定的方式,实时追踪样品上的一个基准点的位置,并根据此移动样品位置,补偿样品漂移。因为基准点可以在样品制备之前加入,并且在成像过程中亮度保持稳定,所以不会增加样品制备的复杂性,可以在整个成像过程中保持样品位置稳定在1nm左右。
(5)iSTORM如何保证激发照明的均匀性?
答:采用tirf照明,一般情况下高斯光束照明均匀性不会对成像造成影响,在对均匀性要求较高的情况下,可以对光束进行处理整形。
(6)可以实现超高实时成像吗?
答:算法经过优化后,iSTORM超高图像可以实现实时重构,立等可得。
(7)是否在三个维度都能保持样品不漂移?
答:可以的,可以使用商用显微镜的锁焦系统,z方向锁焦精度在20-50nm;使用力显三维锁定系统,z方向锁定精度可以达到5nm。
(8)iSTORM有对固定细胞的核孔复合物成像过吗?标记策略有什么建议?
答:有使用nanobody对核孔复合物成像的经验。标记策略需要根据样品情况具体分析。
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走过路过不要错过!力显智能研发的超高分辨率显微成像系统iSTORM,源自诺贝尔化学奖原理的STORM超高分辨率显微成像技术, 实现了光学显微镜对衍射极限的突破,具有20nm超高分辨率、3通道同时成像、3D同步拍摄、实时重构、2小时新手掌握等特点,已实现活细胞单分子定位与计数,并提供荧光染料选择、样本制备、成像服务与实验方案整体解决方案,支持科研人员不断挑战更高分辨率,在生命科学、医学领域取得突破性进展。
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宁波力显智能科技有限公司(INVIEW)是专业从事超高分辨率显微技术和产品研发的科技企业,依托复旦大学的自动控制、新一代信息技术及香港科技大学的生物、光学、图像处理等的技术,拥有光学、生物、自控、机械、信息技术等多领域交叉学科技术团队,将2014年诺贝尔化学奖技术产业化,推出了超高分辨率显微成像系统iSTORM、细胞智能监控助手Cellaview等一系列产品,帮助人们以前所未有的视角观察微观世界,突破极限,见所未见。
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