rProtein A/G免疫沉淀磁珠 (IP Grade)

rProtein A/G 免疫沉淀磁珠 (IP Grade)

rProtein A/G MagPoly Beads (IP Grade)

产品规格: 1ml / 5ml

产品描述：

  rProtein A/G 免疫沉淀磁珠 (rProtein A/G MagPoly Beads) 是由高质量的 Recombination Protein A/G 高密度定向包 被到超顺磁性聚合物微球表面，该产品具有更高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率，一步纯化即可从血清样品中分 离出纯度大于 90%的抗体，操作简便高效。Protein A/G 免疫磁珠同时共价偶联了蛋白 A 和蛋白 G，比单独的蛋白 A 或者蛋 白 G 都有更广的结合范围，实用性更高。   rProtein A/G 免疫沉淀磁珠性能参数：

操作流程：

本操作流程主要为免疫沉淀反应，每次反应使用 50 μL rProtein A/G MagPoly Beads, 可根据需要适当的增加或减少磁珠使用量。

1. 缓冲液准备

所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤。

平衡/洗液：0.15M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH 7.0

洗脱液：0.1M 甘氨酸，pH 3.0

中和液：1M Tris-HCl，pH8.5

交联液：0.2 M 三乙醇胺, pH 8.2

交联剂：DMP (dimetylpimelimidate dihydrochloride) (20 mM DMP 需要现用现配)

终止液：50 mM Tris, pH 7.5

2. 磁珠准备

(1) 将 rProtein A/G MagPolyBeads 颠倒或漩涡混合均匀。

(2) 取 50μl rProtein A/G MagPoly Beads 加入新的 EP 管中。放置在磁分离器上，待溶液变澄清后，用移液器吸弃保护液。

(3) 将 EP 管从磁分离器上取下来，加入 200μl 平衡液，混匀，放置在磁分离器上，收集磁珠，用移液器吸弃保护液。重复洗 2 次。

3. 抗体吸附

(1) 加入 100μl 平衡液将磁珠悬浮，加入目标抗体溶液，充分混匀。

(2) 室温孵育 10min，可以振荡或漩涡混合均匀。

(3) 将 EP 管置于磁分离器上，待磁珠全部吸附后，吸弃上清液。如需要可留做进一步检测。

(4) 加入 500μl 洗杂液混合均匀，置于磁分离器上，待磁珠全部吸附后，吸弃上清液。重复洗杂至少 3 次。

4. 抗体交联 (备选)

(1) 如果需要将抗体和目标抗原复合物共同洗脱，请忽略本步骤，直接进行抗原结合反应操作。

（注：50ul-1ml 磁珠量均可以按照以下步骤操作，无需额外增加交联液体积。）

(2) 加入 1ml 交联液，振荡悬浮，置于磁分离器上，大约 1min，待溶液变澄清后，吸弃上清液。该操作重复两次。

(3) 再加入 1ml 含有 20 mM DMP (dimetylpimelimidate dihydrochloride) 的交联液， 此试剂需要现用现配。振荡悬浮，在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管，促使溶液和磁珠充分接触，约 30min 后，置于磁分离器上，大约 1min，待溶液变澄清后，吸弃上清液。

(4) 使用 1ml 终止液悬浮磁珠，终止交联反应，在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管，促使溶液和磁珠充分接触，约 15min 后，置于磁分离器上，大约 1min，待溶液变澄清后，吸弃上清液。

(5) 加入 1ml 平衡液，颠倒混匀，置于磁分离器上，大约 1min，待溶液变澄清后，吸弃上清液。再重复两次。

5. 抗原结合反应

(1) 加入含有抗原的样品 (通常 100-1000μL)，用移液器轻轻吹打使抗原与磁珠-抗体复合物均匀分散。

(2) 在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管 10min，使抗原与抗体充分结合，如结合力较弱则可在室温下反应 1h 或者在 4℃下反应过夜。

(3) 上述完成抗原吸附的磁珠-抗体-抗原复合物进行磁性分离，收集上清液，以备后续检测。

(4) 向离心管中加入 1ml 洗液，用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散，然后进行磁性分离，弃上清液；从磁分离器上取下离心管，再重复洗涤两次。

6. 抗原洗脱

A. 变性洗脱

此方法洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测。

(1) 从磁分离器上取下离心管，向其中加入 25μl 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀，95℃加热 5min。

(2) 置于磁性分离器上，进行磁性分离，收集上清液进行 SDS-PAGE 检测。

B. 非变性洗脱

(1) 向磁珠-抗体-抗原复合物中加入 50 μl 洗脱液，混合均匀，室温孵育 5min。

(2) 置于磁性分离器上，进行磁性分离，收集洗脱液至新的 EP 管中。

(3) 重复步骤(1)和(2)，收集洗脱液，与(2)中洗脱液混合，加入中和液中和至 pH7.0-8.0。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！