BCA 蛋白定量试剂盒
BCA Protein Assay Kit
产品规格: 40mL(200T), 100mL(500T), 100mL×10(5000T)
保存条件:参照产品组成表
产品组成:
![image 2023030209114783043](https://img1.17img.cn/17img/images/202303/uepic/76053aac-1e94-4a9b-98f8-0776ee5cf2e7.jpg)
产品介绍:BCA 法是常用蛋白浓度测定方法之一。BCA 蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)实现了蛋白浓
度测定简单、稳定性高、灵敏度高和兼容性高的特点。
碱性条件下,蛋白将 Cu2+还原为 Cu+,Cu+与 BCA 试剂形成紫颜色的络合物,测定其在 562nm 处的吸
收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。
在组织细胞裂解实验中,常用浓度的去垢剂 SDS,Triton X-100,Tween 不影响检测结果,但受螯合剂
(EDTA,EGTA)、还原剂(DTT,巯基乙醇)和脂类的影响。实验中,若发现样品稀释液或裂解液本身背景
值较高,可试用生产的 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。
产品特点:
1. 准确灵敏,线性范围广:BCA 试剂的蛋白质测定范围是 10-2000μg/mL。
2. 快速:45 分钟内完成测定,比经典的 Lowry 法快 4 倍而且更加方便。
3. 经济实用:在微孔板中进行测定,可大大节约样品和试剂用量。
4. 不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。
5. 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝。
使用说明:
1. 稀释蛋白标准品:
取 10μL 标准品用 PBS 稀释至 100μL(标准品一般可用 PBS 或 0.9%NaCl 稀释),使终浓度为 0.5mg/mL。
2. BCA 工作液配置:
根据标准品和样品数量,按体积比 A:B(50:1)配制适量 BCA 工作液,充分混匀。BCA 工作液室温仅可保存 24 小时。
3. 蛋白浓度测定:
①将标准品按 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μL 加到 96 孔板的蛋白标准品孔中,加 PBS 补足到 20μL,相当于标准品浓度分别为 0, 0.025, 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5mg/mL。
②对样本做适当稀释,加适当体积样品到 96 孔板的样品孔中,加 PBS 补足到20μL(对样本稀释尽量多做几个梯度,如 2 倍、4 倍、8 倍等;蛋白样品与标准品保证使用相同溶液)。
③各孔加入 200μL BCA 工作液,37℃放置 30 分钟。
④用酶标仪 562nm 测定 OD 值。
⑤根据标准曲线计算出蛋白浓度。
注意事项:
1. 在低温条件或长期保存出现沉淀时,可搅拌或 37℃温育使溶解, 如发现细菌污染则应丢弃。
2. 样品中若含有 EDTA、EGTA、DTT、硫酸铵、脂类会影响检测结果,请试用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒;高浓度的去垢剂也影响实验结果,可用 TCA 沉淀去除干扰物质。
3.要得到更为精确的蛋白浓度结果,每个蛋白梯度和样品均需做复孔, 每次均应做标准曲线。
4.当试剂 A 和 B 混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失,工作液在密闭情况下可保存 1 周。
5.需准备 37℃水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计,测定波长为 540-595nm 之间,562nm 最佳。酶标仪需与 96 孔酶标板配套使用。使用分光光度计测定蛋白浓度时,试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时,应注意防止因水粉蒸发影响检测结果。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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