Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒

Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒

产品及特点 血液样品和各种临床样品（包括组织检查、FFPE 切片或少量细胞样品）都是基因表达分析和诊断的常见材料，但这些样品通常数量有限，质量不高，并且还没法进行第二次取样。所以得到足够 RNA 量供后续试验是一个非常棘手的瓶颈。为解决这一问题，本公司根据 Ribo-SPIA 技术，开发了本产品。Ribo-SPIA 技术的核心是利用 DNA/RNA 嵌合引物，以带 polyA 尾巴的 mRNA 为模板进行逆转录并得到双链 cDNA、RNase H 不间断地在 cDNA 第 1 链中的 RNA 部分产生裂口，DNA聚合酶以此裂口为基础进行链取代聚合反应，产生 cDNA 单链。此技术原理图如下：

本产品具有下列特点：
1. 高效，能线性扩增 1000-10000 倍，能用 5-100 ng 总 RNA 模板扩增得到 5 ug左右的单链 cDNA（扩增的 cDNA 主要来源于总 RNA 中的 mRNA）。
2. 步骤简单方便，扩增在恒温进行，只需要 4 个小时，不需要特殊仪器设备。
3. 保真性好，保持 RNA 样品中各分子的相对丰度。
4. 尤其适用于 RNA 产量和质量都不高的样品。
5. 扩增得到的单链 cDNA 能直接用于各种后续试验，包括 qPCR、芯片分析、杂交反应等。

6. 本产品足够做 10 次双链 cDNA 的合成，20 次 SPIA 扩增。

规格及成分

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期为 1 年。
使用方法 
一：样品 RNA 的制备
本产品不含 RNA 相关试剂，用于 Ribo-SPIA 扩增的每个批次的 RNA 样品最好先做一个预实验。总 RNA 样品的浓度必须在 1-20ng/uL。也可以使用 mRNA，一次 Ribo-SPIA 所需总 mRNA 的量为5-100 ng。过低则需要浓缩，过高则需要用无 RNase 的水稀释。RNA 必须经过DNase 处理，不能含 DNA 污染。微量提取时不能使用核酸类的助沉剂。注意：本产品只能扩增含带 polyA 尾巴的 RNA，不能扩增 DNA 和不含 polyA 尾巴的 RNA。
二：一管式双链 cDNA 的合成
1. 在 0.5mL PCR 管中，按下表配制双链 cDNA 合成反应。注意：最好每次实验设置一个阴性对照组，在此对照中用超纯水替代自备的 mRNA 或总 RNA:

三：SPIA 扩增 

2. 在 0.5mL PCR 管中，按下表配制 120uL 的 SPIA 反应体系。注意：最好设置 两个阴性对照组，在此两个对照中分别用超纯水替代 SPIA 引物和 cDNA 双链 反应液。

四：SPIA 扩增产物的检测
3. 取 5uL SPIA 扩增产物进行 PAGE 电泳检测。标准的反应结果是产生长度在200-2000bp 之间的产物。
4. 如果产物将用于 PCR 定量，则可以不经过纯化直接使用，如果需要用于芯片杂交和浓度测定，则需要按常规的方法纯化 cDNA 以便去除残留的 dNTP 和引物。
5. OD 检测纯度和浓度。在 OD260 的波长下测样品你给的光吸收。由于扩增产物是单链 DNA，故 1OD260=33ug/mL。
6. 所得 DNA 可以放-20℃长期放置。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！