一站式DNA非变性PAGE电泳套装
产品及特点 非变性 PAGE 电泳是研究 SSCP-PCR(single-strand conformationpolymorphism-PCR、单链 PCR 片段构象多态性)和凝胶滞阻(Gel Shift)的重要研究手段,因为在非变性 PAGE 中,DNA 的迁移率除跟长短相关外,还跟其构象和结合的蛋白质相关。本产品就是专门用于非变性 PAGE 的试剂,它具有下列特点:
1. 一站式,用户只需要准备去离子水和样品,十分方便。
2. 安全,免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。
3. PAGE 电泳后可直接用于银染等后续试验。
规格及成分
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注:TEMED 和过硫酸铵(干粉)放一个热封袋,DNA 非变性 PAGE 上样液 放另一个热封袋,低温单独存放。
运输及保存 常温运输,收到货后各成分的保存条件见上表,有效期一年。
自备试剂 去离子水、核酸银染试剂盒
使用方法 用于 SSCP-PCR 分析的非变性 PAGE 电泳(其他应用请相应修改参数)
一、PAGE 浓度的选择:最好使用浓度为 5-12%的丙烯酰胺胶,因为SSCP-PCR 的扩增长度一般在 150-200bp 之间,而 5%的 PAGE 的有效分辨范围为 80-500bp、8%的 PAGE 的有效分辨范围为 60-400bp、12%的 PAGE 的有效分辨范围为 40-200bp。
二、体积的选择:SSCP-PCR 检测需要长约 30-40cm 的测序胶板,可以结合梳子的厚度,计算所需 PAGE 胶的体积。
操作:
1. 配制 PAGE 胶(下面以配制 100 mL PAGE 胶为例计算用量,配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加)
A:新鲜配制 10%的 APS(过硫酸铵):按每 0.1 克过硫酸铵干粉加 1mL去离子水的比例将水加到装有硫酸铵干粉的 1.5 mL EP 管中,摇晃到粉末全部溶解。配制好的 10%的 APS 溶液可以在 4℃存放一周。
B:新鲜配制 30%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液(29:1 的 AB 溶液,下同):在本产品提供的装有 60g 丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺干粉的250mL 棕色塑料瓶中加入 146 mL 自备的去离子水,充分摇晃直到溶解(约需 10-20 分钟),即得到 30%的 AB(29:1)溶液。此溶液最好在一个月内用完,4℃保存。
C:配 SSCP PAGE 胶:在一个 250mL 的三角瓶中,先按下表的用量加入去离子水、30% AB 溶液和 10×TBE 缓冲液。丙烯酰胺单体溶液具有神经毒性,一定要戴手套操作。
C:摇晃混匀。最好能抽真空 10-15 分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应),无条件也可以不脱氧。
D:加入 500uL 10%APS 和 100uL TEMED,迅速摇匀后倒胶。
E: 在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶,插入梳子。
F: 室温聚合 30-60 分钟(低温抑制聚合反应,故最好室温)。
G: 待胶凝固后拔出梳子,用 1×TEB 液冲洗加样孔。
H: 放 4℃冰箱预冷 30 分钟-12 小时。为了防止 PAGE 胶收缩,最好在其顶部加少量 1×TBE 缓冲液。使用预冷的 PAGE 胶有利于单链 DNA 在电泳时保持其构型,这些构型靠 DNA 序列间的链内互补形成,对温度很敏感。
2. 将预冷的凝胶板固定在电泳装置上,往上槽和下槽中加入足够 1×TEB 电泳液。
3. 取 3-5 uL SSCP-PCR 样品,加入等体积 2×非变性 PAGE 上样液,85℃处理 5 分钟后冰浴。用前短暂离心后取 2 uL 上样。上样量跟检测方法的灵敏度相关,上述上样量是针对核酸银染检测法。
4. 连接电源线,打开电源开关。如果 PAGE 中不含甘油,则使用 25W 的功率,电泳 5-7 小时(对 3-40cm 长的 PAGE 胶而言)。如果使用含甘油的PAGE,则使用 8W 的功率,电泳 16-18 小时。由于温度变化过大会改变DNA 构型,所以电泳时最好能保持恒温。对不含甘油的 PAGE,最好恒温在 4℃、对含甘油的 PAGE,最好恒温在 25℃。
5. 终止电泳,取出凝胶进行后续的银染处理。不建议使用灵敏度低于银染的方法,因为 SSCP 异构体的数量都比较少,一般方法没法检测到。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
一站式DNA非变性PAGE电泳套装信息由上海博尔森生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于一站式DNA非变性PAGE电泳套装报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应一站式DNA非变性PAGE电泳套装外,上海博尔森生物科技有限公司还可为您提供质谱兼容型蛋白银染试剂盒、镍柱原位清洁试剂盒、RIPA裂解液(强)等产品,公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。